免疫血清的制备实验 报告.pdfVIP

实验报告 实验名称 多克隆抗体的制备一（抗血清制备） 实验日期 院 系 专 业 班 级 姓 名 学 号 一、实验目的 了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术。 二、实验器材 试剂 ： 酒精棉球、 NDV 灭活油乳剂疫苗、麻醉剂 器材 ： 兔笼、注射器、剃毛剪、手术刀、止血钳、手术剪（组织剪、眼科剪） 、动脉夹、眼科剪、 动脉导管、纱布、棉线、细线、培养箱、冰箱、结扎细线、离心机、温箱 三、实验原理 1.机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产体液免疫和细胞免疫的过程。 一种抗 原能否引发抗体反应，一方面取决于抗原分子表面有无特异性的化学结构——抗原决定簇， 另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。 2.将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应 B 细胞增殖、分化 形成浆细胞并分泌特异性抗体。 抗原进入机体经过一定的潜伏期， 抗体效价逐步上升， 达到 高峰后，能维持一短暂的时期， 以后又逐渐下降， 但当第二次接触相同的抗原时， 抗体的上 升较前次为快，高峰时的效价也比前次为高。抗体持续的时间也较长，此也称为再次反应。 待动物血清中存在大量抗体时， 采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫 血清或抗体） 。 3.由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合 成和分泌各种抗原决定簇的抗体， 免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物， 所以这种免 疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体。 4.多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的 因素外， 还需注意动物品系的选择、 抗原注射的浓度、 剂量、次数、 间隔时间及注射途径等。 对于免疫原性较弱的可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂，以增强免疫性。 四、实验过程及步骤 1.免疫接种 1）取一只健康大白兔固定在兔笼中 2 ）酒精消毒大白兔皮肤后，通过皮下或皮内注射方式接种大白兔，共计注射 8-10 个位置， 每一处约 0.1ml 。 3）为提高免疫血清效价，通常需要进行 2-3 次加强免疫，每次免疫间隔 10-15 天。然后再 接免疫结束后的血清采集过程。 4 ）注射完毕，将大白兔从兔台取下，放回饲养笼。 2.颈动脉放血 1）取一只接种过的大白兔固定于兔笼，耳缘静脉注射合适剂量的麻醉剂麻醉。将麻醉后的 大白兔固定于兔台，用棉线固定四肢，细线固定门牙于铁柱，使颈部完全暴露。 2 ）用剃毛剪贴着皮肤减去颈部的毛，手术刀在颈部中央切开皮肤约 3-4cm ，纱布吸去多余 的血液。用止血钳提拉住两边的皮毛，组织剪将切口扩大至 7-8cm 。分别剪开黏膜层、肌肉 层，用止血钳扩大开口使之与皮肤一致，游离出颈动脉约