实验10脂质体的制备幻灯片.ppt

【附注】 （1）柠檬酸缓冲液 称取柠檬酸10.5g和柠檬酸钠7g置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml，混匀，即得。 （2）NaHCO3溶液 称取NaHCO3 50g，置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至1000m1，混匀，即得。 * 4．盐酸小檗碱脂质体包封率的测定 （1）阳离子交换树脂分离柱的制备 取已处理好的阳离子交换树脂适量，装于底部已垫有少量玻璃棉（或多孔垫片）的5ml注射器筒中（总量约4ml刻度处），加入PBS水化过的阳离子交换树脂，自然滴尽PBS，即得。 （2）柱分离度的考察 ①盐酸小檗碱与空白脂质体混合液的制备：精密量取3mg／m1盐酸小檗碱溶液0.1ml，置小试管中，加入0.2ml空白脂质体，混匀，即得。 * ②对照品溶液的制备：取①中制得的混合液0.1ml置10ml量瓶中，加入95％乙醇6ml，振摇使之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液4.0ml于10ml量瓶中，加PBS至刻度，摇匀，即得。 ③样品溶液的制备：取①中制得的混合液0.1m1至分离柱顶部，待柱顶部的液体消失后，放置5min，仔细加入PBS(注意不能将柱顶部离子交换树脂冲散)，进行洗脱(约需2-3ml PBS)，同时收集洗脱液于10m1量瓶中，加入95％乙醇6ml，振摇使之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃取初滤液，取续滤液为样品溶液。 ④空白溶剂的配制：取乙醇(95％) 30ml，置50m1量瓶中，加PBS至刻度，摇匀，即得。 * ⑤吸收度的测定：以空白溶剂为对照，在345nm波长处分别测定样品溶液与对照品溶液的吸收度，计算柱分离度。分离度要求大于0.95。 柱分离度 = 1－[A样/（A对×2.5） ] 式中，A样—样品溶液的吸收度；A对—对照品溶液的吸收度；2.5—对照品溶液的稀释倍数。 * 注意：在进行柱分离度实验前，需要用空白脂质体对分离小柱进行饱和，具体操作如下：量取0.2ml空白脂质体，置于分离小柱顶部，待柱顶部的液体消失后，仔细用5mlPBS进行洗脱，待液体滴尽即可。 * （3）包封率的测定 精密量取盐酸小檗碱脂质体0.lml两份，一份置10ml量瓶中，按柱分离度考察项下②进行操作，另一份置于分离柱顶部，按 “柱分离度考察”项下③进行操作，所得溶液于345nm波长处测定吸收度，按下式计算包封率。 包封率(％)=（ Al /At ）×100％ 式中，Al—通过分离柱后收集脂质体中盐酸小檗碱的吸收度；At—盐酸小檗碱脂质体中总的药物吸收度， At = A样×2.5 ，2.5为稀释倍数。 * 脂质体检测结果 脂质体 类别 形态 最大粒径(?m) 最多粒径(?m) 备注 空白脂质体 被动法载药脂质体 主动法载药脂质体 * 五、思考题 1. 以脂质体作为药物载体的特点。请讨论影响脂质体形成的因素。 2. 从显微镜下的形态上看，“脂质体”、 “乳剂”及“微囊”有何差别？ 3. 如何提高脂质体对药物的包封率？ 4. 请问如何选择包封率的测定方法？本文所用的方法与“分子筛法”、“超速离心法”相比，有何优缺点？ 5. 请试着设计一个有关脂质体的实验方案？本实验方案还有哪些方面有待改进？ * 脂质体的制备及包封率的测定 * 一、?????? 实验目的 1、掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。 2、掌握用阳离子交换树脂测定脂质体包封率的方法。 3、熟悉脂质体形成原理，作用特点。 4、了解“主动载药” 与“被动载药” 的概念。 * 二、 实验原理 脂质体是由磷脂与(或不与)附加剂为骨架膜材制成的，具有双分子层结构的封闭囊状体。 常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃