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转基因动物鉴定和建系
朱焕章
体细胞核移植
精子
5
转基因动物遗传修饰策略和载体设计
• 转基因表达载体设计策略
►一般转基因表达载体设计
►条件性转基因表达载体设计
►细菌人工染色体(BAC)转基因表达载体设计
• 基因打靶策略和载体设计
►完全基因剔除
►条件性基因打靶
►Knock in
►Gene trap
►大片段染色体重排和删除
The Basic
Principles
Behind ES cells: 129Sv - agouti
Host Blastocysts: C57Bl
(Black)
Gene Foster Mothers: CD1 (White)
Targeting
From: Developmental Biology (6th Edition),
Scott F. Gilbert, Sinauer Press
转基因小鼠鉴定
• 外源基因整合检测
► Dot blotting(无同源性时可选用)
PCR (快速灵敏)
Southern blotting(准确可靠)
• 整合位点检测(FISH/LM-PCR)
• 整合拷贝检测(Southern blotting )
• 转录水平
► Northern blotting
► RT-PCR
► RNase 保护性分析
• 翻译水平(Western/Elisa)
• 生化分析
• 表型分析
1982年,英国的 《自然》杂志发表了一篇文章:有两个美国实
验小组利用转基因技术,将大鼠生长激素重组基因导入到小鼠
受精卵中,培育出具快速生长效应的“转基因超级鼠”
(supermouse) 。转基因鼠比与它同胎所生的小鼠生长速度快
2~3倍,体积大一倍。
转基因小鼠鉴定
• 外源基因整合检测
► Dot blotting(无同源性时可选用)
PCR (快速灵敏)
Southern blotting(准确可靠)
• 整合位点检测(FISH/LM-PCR)
• 整合拷贝检测(Southern blotting )
• 转录水平
► Northern blotting
► RT-PCR
► RNase 保护性分析
• 翻译水平(Western/Elisa)
• 生化分析
• 表型分析
(一)核酸分子杂交技术
核酸分子杂交
是指单链核酸分子(DNA或RNA)在特定条件下,
与另一条互补的特异核酸链形成稳定双链的过程。
主要依据: 碱基互补、变性和复性
DNA与DNA杂交:A=T 、G≡C ;
碱基互补
DNA与RNA杂交: A=U 、G≡C ;
变性:
在一定温度下,使核酸双链解开为两条单链;
复性:
随温度逐渐恢复,变性的两条单链重新形成互补双链
hybridization
• DNA:DNA 5’ A T G C C G A T
3’ T A C G G C
DNA:RNA
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