病理检验技术 8.HE制片质量控制 HE制片质量控制—影响HE切片质量的主要因素.pptx

病理检验技术常规组织病理技术HE制片质量控制影响HE切片质量的主要因素影响HE切片质量的主要因素组织处理和包埋切片染色影响HE切片质量的主要因素组织处理和包埋 1.固定要及时 组织固定是制片的关键，组织固定的好坏，决定以后制片的各个环节。 一般采用10%的甲醛液(实际含甲醛4%)，如能采用10%的中性缓冲甲醛液固定则更好。固定时所加10%甲醛的体积应为组织体积的10～20倍。巨大组织须切成小片固定，大小约22mm×22mm，厚2～3mm的组织块进行脱水。 影响HE切片质量的主要因素组织处理和包埋 2.脱水要彻底 常用乙醇脱水，由低浓度逐级至高浓度，逐步置换组织内的水分。 注：低浓度乙醇时间可适当延长，至无水乙醇时则要掌握恰当时间，一般是2～3小时，穿刺小组织仅需30～40分钟，并采用Ⅱ级或Ⅲ级无水乙醇。 3.透明宜充分 透明剂多采用二甲苯，透明时间依据组织的大小和厚薄，一般组织约需60～90分钟，穿刺小组织15～25分钟，并采用Ⅱ级或Ⅲ级二甲苯。组织呈透明状。影响HE切片质量的主要因素组织处理和包埋 4.浸蜡需足够 浸蜡常用纯净熔点稍低的石蜡，可采用Ⅱ级或Ⅲ级，以尽量清除二甲苯。开始一级用熔点较低石蜡，最后一级用熔点较高石蜡或包埋石蜡。浸蜡时间依据组织大小和厚薄而定，一般为2～3小时。 注：浸蜡时恒温箱或自动脱水机蜡缸内的温度应比所用石蜡熔点稍高些，以保持石蜡恰在熔化状态；在浸蜡期间温度一定要恒定。 影响HE切片质量的主要因素组织处理和包埋 5.包埋应恰当 包埋时，包埋石蜡的温度要比组织浸蜡高4～6℃，否则包埋冷凝后组织与石蜡易分离。包埋时把组织最大最平切面或所需的病灶切面向下置入包埋模具。对皮肤、胃肠管道和囊壁等层次清楚的组织，包埋后其切面应包含有各层组织、对子宫刮出物的内膜小组织，应尽可能包埋在同一平面上以利全部切出。影响HE切片质量的主要因素切片 1.切片要切出薄而平整的蜡带,关键在切片刀。一次性刀片要锋利度，否则应适时更换新刀片。如用切片刀一定要研磨锋利。其次，第一次切片时，要转动刀座上的弧形刻度盘，边切边选取最合适的切片刻度。此刻度即相当于余隙角2°～4°，在此范围内，才能切出良好的蜡片。记住此切片刻度，以后如用同类型的一次性刀片或切片刀，就无须再调校。切片前要把切片机上有关的各螺旋拧紧。影响HE切片质量的主要因素切片 2.摊片要平整无皱折 蜡片移置恒温贴片盆内展开，使整张蜡片平整无皱，蜡片光面向下。恒温贴片盆的内壁和底面应黑色，其水温应根据所用包埋石蜡的熔点调节在40～46℃。摊片时水盆一定要清洁，避免造成组织污染。 3.贴片时要注意“定点”和“定向” 要把组织蜡片捞至载玻片的适宜位置，即注意“定点”和“定向”。贴片后提起玻片时,要把玻片一角接触一下水面，以带走多余的水分，否则玻片上留存的水分，可使已“定点”和“定向”的组织蜡片移位，偶或在组织蜡片上留下一个圆形的水迹。影响HE切片质量的主要因素切片 4.把握烤片温度和时间 贴片完毕，立即置入电热烤片箱内烤片，烤片箱内温度应调至60～65℃，烤片时间约30～60分钟，也可置于电热板上烤片，使组织蜡片上的蜡呈熔化的状态，这样蜡片可牢固地粘贴于载玻片或盖玻片上。影响HE切片质量的主要因素染色 1.切片脱蜡要于净 脱蜡不全的组织切片，染色后组织和细胞模糊不清，如雾中观花。脱蜡剂用二甲苯，实行Ⅱ级脱蜡。一般脱蜡时间约10～20分钟。 2.苏木精染液要配好 苏木精染液配制关键在氧化。如氧化汞作为氧化剂的苏木精染液，每次染色之前必须过滤或用纸把液面的氧化膜拖走，以免污染切片。现在多用碘酸钠作为氧化剂来配制苏木精染液。不同苏木精液的染色时间为5～20分钟。日常使用的苏木精液要定期过滤；根据每天染片量的多少，应每周或隔周更换一次新液。影响HE切片质量的主要因素染色 3.盐酸乙醇分化要适度 分化是一个重要环节，分化时间一般为2～3秒，苏木精液染色后若不分化或分化不足，组织着染过深胞核境界不清晰；若分化过度，胞核过淡不清楚。若用Mayer苏木精液，通常都不需要分化。 4.分化后要充分水洗 流水冲洗一般要15～30分钟。目的：一方面苏木精液染胞核，经酸分化后胞核呈棕红色，通过流水冲洗洗去切片上的酸，使苏木精色淀重新形成胞核重显蓝色。另一方面分化后切片留有酸液，易使切片褪色。影响HE切片质量的主要因素染色 5.伊红染色要适宜 伊红水溶液的染色时间约2～5分钟。伊红是作为蓝染胞核的对比染色，染色要适当。每200ml伊红液加1滴冰醋酸可起促染作用，如加酸太多，可使伊红液沉淀而慢慢失效。 6.切片脱水、透明要彻底 HE染色后，还要经无水乙醇和二甲苯彻底脱水透明。切片脱水要经过多次无水乙醇才转入二甲苯透明。影响HE切片质量的主要因素染色 7.封胶要中性,浓度要适中 树胶受热或放置时间过长，因氧