病理检验技术 3.病理组织的固定 病理组织的固定液的种类.pptx

病理检验技术;常规组织病理技术;常规组织病理技术;固定液：分为单纯固定液和混合固定液两类。 单纯固定液：采用单一种化学试剂固定。如甲醛液。 混合固定液：采用两种或两种以上化学试剂混合配成，混合的各种试剂要考虑对组织的互补作用。如固定糖原的?Gendre液，其内有乙醇和冰醋酸，其中乙醇可沉淀糖原，但会使组织收缩，配以冰醋酸后，因酸可使组织膨胀，抵消乙醇对组织的收缩，有些混合液可起多种作用。;1.单纯固定液 （1）甲醛液：又称福尔马林，为甲醛(H-CHO)蒸气溶于水的饱??液，最大饱和度为36%～40%，配制各种浓度甲醛液时传统作为100%甲醛液来计算。甲醛液配制简单，价钱便宜，是病理组织固定常用的固定液。 性质： 甲醛有刺激性气味，腐蚀性强，其蒸气对呼吸道黏膜和眼睛有刺激性。 优点：甲醛液对组织的渗透力较强，固定均匀，能够保存脂肪和类脂质。 ; 甲醛液固定的注意事项：厚度为0.5cm的组织，固定时间约需12小时，较厚组织标本固定时间可适当延长，甲醛液固定组织若时间过长易氧化为甲酸，组织呈酸性，使细胞核染色不良，故特殊组织标本应采用中性甲醛液固定。若固定含血较多的组织，易产生甲醛色素，使组织出现深棕色无定形颗粒。这种甲醛色素，在切片脱蜡至水后置入苦味酸饱和于95%乙醇内5～30分钟即可除去。甲醛液容易发生聚合，如放置过久，甲醛液会产生白色的多聚甲醛沉淀，甲醛浓度会降低。市售甲醛液常加入约12%甲醇作为稳定剂，有助于防止多聚甲醛的形成。;甲醛液固定液的配制： 一般组织常用10%甲醛水溶液固定，配制时取甲醛液1份加蒸馏水9份混合即成10%甲醛液(实际只含4%甲醛)。 中性甲醛液的配制，取10%甲醛液，加入碳酸镁至饱和后，pH约7.6，如加入碳酸钙至饱和后，pH则为6.5。如需配制缓冲中性甲醛液，可取甲醛液100ml，蒸馏水900ml，磷酸二氢钠4.02g，无水磷酸氢二钠6.5g，混合溶解后，pH即为7.0。;1.单纯固定液 （2）乙醇(ethyl alcohol)：俗称酒精，为无色透明液体，市售有无水乙醇和95%的乙醇两种。乙醇可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，前两者所产生沉淀不溶于水，后者所产生沉淀仍能溶于水，所以单纯用乙醇固定组织其核染色不良。乙醇对组织具有固定、硬化兼脱水作用，能保存糖原，但又能溶解脂肪。因其对组织有硬化作用，甚少单独使用而多与其他试剂配成混合固定液。作为细胞学涂片固定，??以95%乙醇和乙醚等份配成100ml，再加冰醋酸5滴混合或在95%乙醇100ml中加入冰醋酸5滴混合后作为固定液，固定时间约15分钟。前者为低温恒冷切片做HE染色的较好快速固定液，仅固定数秒钟即可。;1.单纯固定液 （3）甲醇(methyl alcohol)：又称木醇，为无色透明液体。甲醇有毒，误服少量可使眼睛失明。多用于血涂片的固定和用于配制 Giemsa染液等。;2.混合固定液 （1）8:1:1固定液：由80%的乙醇8份、甲醛液1份和冰醋酸1份组成。仅适用于常规快速活检组织标本的组织固定。 特点：醋酸使组织软化和膨胀，可抵消乙醇使组织收缩和硬化的缺点。醋酸的渗透力强，短时即可渗入组织，故固定速度快而均匀，但可溶解红细胞，使胶原膨胀，对组织抗原也有掩盖作用。 ;2.混合固定液 （2） Bouin固定液：由苦味酸饱和水溶液75ml，甲醛液25ml，冰醋酸5ml混合而成。 特点：苦味酸可沉淀蛋白，引起组织收缩，但不使组织硬化；与甲醛和冰醋酸混合后，穿透速度快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。特别对Masson三色法的结蹄组织和肌纤维染色有媒染作用，经其固定后的组织着色鲜艳。用此固定液也能软化皮肤和肌腱，以利于切片。小块组织固定数小时至一晚，不宜超过24小时。用 Bouin液固定后组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水，经乙醇脱水时可除去大部分苦味酸，组织留有一点黄色,对染色也无影响。;2.混合固定液 （3）Zenker固定液：先用氯化汞5g，重铬酸钾2.5g，硫酸钠1g，蒸馏水100ml配成?Zenker储备液。临用前取储备液95ml加冰醋酸5ml而配成的?Zenker固定液。Zenker储备液室温可保存6个月以上，Zenker固定液则需临用前配制。 特点：?Zenker固定液对细胞核有良好的固定作用，对酸性染料染色有媒染作用。故组织经?Zenker固定液固定后，细胞质和胶原纤维染色效果较好，常用于作三色染色的组织固定液。固定时间为3～18小时，穿刺等小块组织为1小时。组织固定后需经流水冲洗以除去重铬酸钾。切片中常有汞盐沉淀，可用碘乙醇液除去。 ;