分析化学、教学服务模块 教学课件、高效液相色谱法概述 高效液相色谱法概述.pptx

高效液相色谱法概念永州职业技术学院 李玉婷高效液相色谱法概述液相色谱分析是在经典的液体柱色谱基础上，引入了气相色谱的理论；在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种柱色谱技术被称做高效液相色谱法。一、高效液相色谱法简介 高效液相色谱法概述（一）.发展历史:100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素时采用的实验方法:Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱）描述他的实验方法，即:Chromatography(色谱法)20世纪30年代开始广泛研究和应用 (柱色谱,薄层色谱→气相色谱)高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代高效液相色谱法概述（二）.色谱法概述 色谱法——混合物最有效的分离、分析方法，是一种分离技术。混合物分离过程：试样中各组分在色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配。一相固定不动，称为固定相。另一相是携带试样混合物流过固定相的液体，称为流动相。高效液相色谱法概述（三）.高效液相液相色谱仪1.贮液瓶6.色谱记录仪3.进样器2.高压泵5.检测器4.分离柱高效液相色谱法概述二、高效液相色谱法的特点（一）特点高压、高效、高速、高灵敏、高选择性。适用：高沸点、热不稳定样品 以液体作为流动相，液体流经色谱柱时，受到阻力较大必须对流动相施加高压。 一般可达到150～300kg／cm2 一般约可达6000理论塔板／米 流量可达l—10mL／min 可分离不同类型化合物和异构体，也可分析在性质上极为相似的化合物(同位素、同分异构体、空间异构体、手性化合物） ①紫外检测器的最小检测量可达(10-9 g)；荧光检测器的灵敏度可达10-11g。 ②所需试样很少；微升数量级高效液相色谱法概述（二）HPLC与GC区别HPLCGC分析对象的区别适于溶解后能制成溶液的样品.对分子量大、难气化、热稳定性差，样品均可检测 。占有机物的80%适于能气化、热稳定性好、沸点低的样品，占有机物的20%流动相的区别惰性气体，N2、H2、He流动相为液体操作条件差别加温操作室温；高压分析样品区别破坏样品，不能回收不破坏样品，能回收高效液相色谱法概述（三）高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，在技术上，流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。高效液相色谱法概述三、高效液相色谱法的应用领域生物工程环保生物医药农业药品与食品检测高效液相色谱法是分析领域中应用最广泛的手段之一THANK YOU