环境监测 粪大肠菌群的测定方法 水中粪大肠菌群的测定演示文稿.ppt

3.2 水样制备及稀释 （1） 采样 采集污水处理厂出水口的水样 采样瓶 （2）水样的稀释及接种 1 mL 10 mL 90 mL 无菌水 90 mL 无菌水 原液 10-1 10-2 1 mL 1 mL 9 mL 无菌水 10-3 9 mL 无菌水 10-4 9 mL 无菌水 10-5 10 mL 3.3 粪大肠菌群的初发酵 10-5 10ml 3倍 10 ml 1倍 10 ml 1倍 1 ml 1 ml 37℃ ± 0.5℃ 24 h ± 2 h 10-4 1 ml 10-3 杜氏小管 杜氏小管 杜氏小管 1.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡（阳性） 2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡（阴性） 3.4 观察粪大肠菌群的初发酵结果 表2.1 记录—初发酵阳性管数 项目 由接种量为10-3ml管转接 由接种量为10-4ml管转接 由接种量为10-5ml管转接 阳性管数 阴性 阳性 轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用接种环将培养物转接到EC培养液中。 在44.5℃±0.5℃下培养24h±2h。培养后立即观察，发酵管产气则证实为菌群阳性。 3.5 粪大肠菌群的复发酵试验 表2.2 记录—复发酵阳性管数 项目 由接种量为10-3ml管转接 由接种量为10-4ml管转接 由接种量为10-5ml管转接 阳性管数 阳性 空白对照 （阴性） 接种EC培养液复发酵  测定方法和原理 1 试剂和仪器 2 测定过程 3 3 结果计算 4 4 学习内容 根据3种不同接种量（对应表3中10ml、1ml、0.1ml）的发酵管所出现阳性结果的数目，查得每 100 ml水样中的粪大肠菌群MPN值。 再按照公式换算样品中粪大肠菌群数（MPN/L）。 4.1 粪大肠菌群测定的结果分析与报告 注：如果有超过三个的稀释度用于检验，在一系列的十进稀释当中，计算MPN时，只需要用其中依次三个的稀释度，取其阳性组合。选择的标准是：先选用5支试管全部为阳性的最大稀释（小于它的稀释度也全部为阳性试管），然后再加上依次相连的两个更高的稀释。用这三个稀释度的结果数据来计算MPN值。 式中：C——样品中粪大肠菌群数，MPN/L； MPN值——每100ml样品中粪大肠菌群数，MPN/100ml； 100——为10×10ml。其中，10将MPN值的单位MPN/100ml转换为MPN/L， 10ml为MPN表中最大接种量； f——实际样品最大接种量。 例如：实验结果对照表3查的数据为 谢谢 THANKS 环境监测 Environmental Monitoring 主讲教师：李孝坤 水中粪大肠菌群的测定  测定方法和原理 1 试剂和仪器 2 测定过程 3 3 结果计算 4 4 学习内容 1.1 方法名称与适用范围 水质 粪大肠菌群的测定——多管发酵法 HJ 347.2 - 2018 方 法 名 称 适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪 大肠菌群的测定 检出限：12管法为3 MPN/L； 15管法为20 MPN/L。 适 用 范 围 1.2 相关术语 粪大肠菌群，又称耐热大肠菌群。44.5℃培养24 h，能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。 最大可能数，又称稀释培养计数，是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学理论，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估算一定体积样品中目标微生物存在的数量（单位体积存在目标微生物的最大可能数）。 1.3 方法原理 将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37 ℃ 初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。44.5 ℃ 复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。  测定方法和原理 1 试剂和仪器 2 测定过程 3 3 结果计算 4 4 学习内容 2.1 培养基和试剂 (1) 单倍乳糖蛋白胨培养基 成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳 糖 5g