HPV临床常用检测方法（1）.pdf

由于HPV 不能在体外细胞培养，故不能用简便的血清血检测进行HPV 的诊断和分型。临床上 用于检测 HPV 的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和 PCR 等，其中以PCR 方法的敏感性最高，是目前应用最多 感染的HPV 型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后,是进行HPV 检测的主要内容。 目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA 的检测。 1、现有的HPV 实验室主要检测手段: ① 聚合酶链反应(PCR, Polymerase Chain Reaction):扩增位于两段已知序列之间的 DNA 片断的方法。该法有较高的敏感度,可进行HPV 分型,缺点是对实验室环境要求较高,容 易发生样本间的交叉污染,从而导致假阳性率高。 ② 核酸杂交检测 有较好的特异性和敏感度,还可以进行HPV DNA 的分型,各种核酸杂交检测方法有一定的 优缺点。 A 核酸印迹原位杂交 适用于HPV 分型和HPV DNA 分子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标 本,不便在临床上大规模使用。 B 斑点印迹 其敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存在有放射 性污染,是环保所不能轻视的问题。 C 原位杂交（in situ hybridization，一种核酸杂交技术，可用来测定基因或特定核 苷酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA） 通过非放射性探针对石蜡组织进行检 测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。 D 杂交捕获法(Hybrid Capture) 杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNA 双链释放并分解 成为可以杂交的核苷酸单链,DNA 单链与RNA 组合探针结合为RNA-DNA 杂合体,特异性抗体将 RNA-DNA 杂合体捕获,偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA 杂合体结合,碱性磷酸酶使酶 底物发光,根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA-DNA 杂合体的含量。能检测 13 种高危型HPV,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。 各种检测方法的比较 各种检测方法的比较 1 方法学 灵敏度 特异性 技术特点 细胞学（Cytology） 低 低 操作容易，成本较低，准确度较差 斑点印迹（Dot blot） 中 中 有一定放射性 核酸印迹原位杂交（southern 高 高 标准、麻烦，不宜大规模使用 blot hybridization） 原位杂交（In Situ 高 中 蜡块组织包埋内检测HPV hybridization） 无放射性，易使用，高、低危型间有交叉反 杂交捕获（HC、HC2） 高 中 应，且不能分型 取材容易，但目前已应用试剂的只能检测少 普通多聚酶链反应（PCR） 很高 中 数单一型别，如6、11、18 等，且由于技术上的问 题存在假阳性 2、必威体育精装版推出的HPV 的实验室检测技术 高灵敏度高危型HPV 分型多色荧光实时PCR 试剂：为欧洲著名分子生物学研究机构专门 针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HPV 分型多色荧光实时PCR 检测试剂，可同时检测高危 型中最主要的16、18、31/33、35/45 型。 了解宫颈疾病人乳头