dna提取各种缓冲液的配制.pdf

植物总 DNA 的提取 一、所需仪器设备及消耗品 剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、500、200 、100、50ml ）、量筒 （1000、500、100、10ml）、烧杯（1000、500、200 、100ml）、pH 试纸、电子天平、高 压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮）、水浴锅、离心机、移液器（1 套）、枪头（1ml、 200ml 、20μl ）、枪头盒、离心管（1.5ml）（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、 塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片 二、所需化学药品及试剂 CTAB、NaCl 、EDTA-Na ·2H O、Tris、冰乙酸、硼酸、β-巯基乙醇、NaAc 、氯仿（三 2 2 氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（EB ）、RNase 、 NaOH 、HCl （浓）、ddH O 2 三、各种缓冲液的配制 （一）2%CTAB 提取缓冲液（300ml ）（高压灭菌） 4mol/L 的NaCl 35ml×3=105ml 1mol/L 的Tris-HCl 10ml×3=30ml 0.5mol/L 的EDTA 4ml×3=12ml CTAB 2g×3=6g （二）1×TE （母液pH8.0 ）（50ml ）（高压灭菌） 1mol/L 的Tris-HCl （pH8.0 ） 500μl 0.5mol/L 的EDTA （pH8.0 ） 100μl 最后加 ddH O 定容到 50ml 2 工作液为 0.1×TE （45ml 灭菌的 ddH O 中，加入5ml 已灭菌的 1×TE） 2 （三）4mol/L 的NaCl （150ml）（高压灭菌） 35.055g 的NaCl ，加ddH O120ml 溶解，再加水定容到 150ml 2 （四）1mol/L 的NaCl （400μl ）（用于配制RNase 储存液） 取 4mol/L 的NaCl （已灭菌）100μl，加 300μl 灭菌的 ddH O 。 2 （五）3mol/L 的NaAc 溶液（pH5.2 ）（50ml ）（高压灭菌） NaAc·3H O 20.405g 2 加 ddH O 30ml 2 用冰乙酸调节 pH 至 5.2 加 ddH O 定容到 50ml 2 （六）RNase 储存液（10mg/ml）（1ml） 1mol/L 的Tris-HCl （pH7.5 ） 10μl 1mol/L 的NaCl 15μl RNase 10mg 沸水浴 15~20min （七）EB 储存液（1mg/ml） EB 30mg ddH O 30ml 2 磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。 1 制胶时 EB 终浓度为 0.5μg/ml （30ml 加 15μl、40ml 加 20μl ） （八）10×TBE 缓冲液（电泳缓冲液）（高压灭菌） Tris 碱