THP1 细胞培养（整理）（一）.pdf

学 海 无 涯 生物实验：THP-1 细胞培养 THP-1 是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患 者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原 HLA 型为：A2 ，A9 ， B5，DRw1，DRw2。 工具/原料 • 培养基：RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093) • 胎牛血清：Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141) • 二甲亚砜：DMSO (SIGMA D2650) • 双抗 P/S (Penicillin/Streptomycin) （GIBCO #15140-122） 方法/步骤 1. 1 1 学 海 无 涯 细胞培养：THP-1 细胞培养于含有 10%FBS+1%P/S 的 RPMI-1640 培养基 中，培养环境为 37℃，5%CO2。可以每隔 3-4 天加一些新鲜的培养基，或 直接传代。 2. 2 细胞传代：当细胞密度达到约 8x10^5cells/ml 左右时，即可进行传代。由于 是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于 1x10^5 cells/ml。 3. 3 细胞冻存：取差不多 1x10^7 个细胞，用 1ml 含有 10%DMSO 的 FBS 重悬， 转入冻存管，于-80℃冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。 END 注意事项 • 细胞养不好，可能的原因有，THP-1 细胞特别依赖细胞浓度，ATCC 上 10 5 到 106 每 ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。 • 细胞株的来源很重要，如直接来源于 ATCC （American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。 • 注意细胞的密度一定要高，介于 5×105—— 106/ML 之间，增值的快。细胞数 量太少，不适合 THP-1 生长，一般状态不好的 THP-1 在培养了 3 天后数量仍然 不多，继续培养一天或者两天，培养基 严重泛黄，细胞数会增加。这一点不同 于同是单核细胞系的 U937 细胞。 • THP-1 细胞适合在细胞 Ph 环境偏酸性环境生长，对培养基变化非常敏感，所以 尽量使用相同 Ph 的 1640。 2 学 海 无 涯 • 传代后切忌常移出培养箱观察，否则会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现 为细胞内颗粒变多。一般 THP-1 生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议 传代后 3 ～4 天再观察，一般4 天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增;1)THP-1 细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。越酸的条件，细胞密度越大，细胞就 长得越好;2）不要频繁换液，一般2-3 次换液离心一次（只是补充培养基）3）使 用 1640 （ATCC 推荐），注意加碳酸氢钠 2.5g 就可以了，宁酸勿碱; 4）注意 冻存的时候密度大些，推荐用血清冻存。 • 复苏比较慢，建议开始用小瓶，不要用一次性的。 3