农杆菌介导的植物转基因技术.pptxVIP

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2020-10-25 发布于上海
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农杆菌介导的植物转基因技术.pptx

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;一、转基因植物概述; 1、学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理； 2、掌握农杆菌介导转化植物的实验方法，了解转基因技术的操作流程。; 根癌农杆菌，属根瘤菌科，为革兰氏阴性。根癌农杆菌感染双子叶植物时，可在被感染的伤口形成冠瘿瘤,诱导有关的质粒为Ti质粒。Ti质粒上有一段T-DNA区，人们将外源基因插入到T-DNA区，借助农杆菌的感染使携带外源基因的T-DNA区转入植物基因组中，从而实现外源基因向植物细胞的转移和整合。 ; 1、仪器：超净工作台，离心机，恒温摇床，组织培养室； 2、试剂：农杆菌EHA105，YEB培养基，MS液体培养基，共培养基（MS+6-BA+NAA），分化培养基（MS+6-BA）生根培养基（MS+IBA+NAA）； 3、材料：红花无菌苗。;五、实验方法;（二）制备工程菌（摇菌）? ; 将农杆菌离心，2000 rpm，10min，收集菌体,目的是去除细菌培养基的高浓度盐。;（四）重悬菌体 ; 将预培养的红花子叶放入菌液中浸染8-25min，在侵染过程中轻轻摇晃，确保菌液充分进入到红花子叶中。 ; 取出外植体，将其放在无菌滤纸上，充分吸干菌液，避免菌液残留在红花子叶上，使其在培养过程中，菌液过量生长。; 首先将红花子叶置于共培养上，使其生长。培养一周后，将其转入分化培养基上，进行培养，待其诱导分化出不定芽后，继续培养，不定芽分化成苗后，将其移入生根培养基中，培养获得转基因植株。;六、实验结果;七、注意事项;八、思考题