药品无菌检查ppt参考课件.ppt

洁净实验室 沉降菌 最少采样点参照悬浮粒子GB/T16292-2010 采样点的位置参照悬浮粒子GB/T16292-2010 最少培养皿数 洁净度级别 最少培养皿数（90mm） 100 14 10000 2 100000 2 300000 2 * * 洁净实验室 结果计算 平均菌落数=(M1+M2+……MN)/N M1——1号培养皿菌落数 N ——培养皿总数 结果评定—同浮游菌 * * 洁净实验室 表面微生物 表面微生物测定是对环境、设备和人员的表面微生物进行监 测，方法包括接触碟法和擦拭法。 接触碟法——将充满规定的琼脂培养基的接触碟对规则表面或平面进行取样，然后置合适的温度下培养一定时间并计数，每碟取样面积约为25 cm2，微生物计数结果以cfu/碟报告； 擦拭法——接触碟法的补充，用于不规则表面的微生物监测，特别是设备的不规则表面。擦拭法是采用合适尺寸的无菌模板确定擦拭的面积，取样后，将拭子置合适的缓冲液或培养基中，充分振荡，然后采用适宜的方法计数，每个拭子取样面积为约25 cm2，微生物计数结果以cfu/拭子报告。 接触碟法和擦拭法采用的培养基、培养温度和时间同浮游菌或沉降菌（一般采用TSA，当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增加SDA） 表面菌测定应在实验结束后进行。 * * 洁净实验室 推荐的药品洁净实验室的监测频次及监测项目 洁净度级别 悬浮粒子 浮游菌 沉降菌 表面微生物 A级 每月 每月 每次 每次 B级 每季度 每季度 每周 每周 C级 每半年 每半年 每季度 每季度 D级 每半年 每半年 每半年 每半年 * * 洁净实验室 如果出现连续超过纠偏限和警戒限、关键区域内发现有污染微生物存在、空气净化系统进行任何重大的维修、消毒规程改变、设备有重大维修或增加、洁净室（区）结构或区域分布有重大变动、引起微生物污染的事故、日常操作记录反映出倾向性的数据时应考虑修改监测频次。 * * 洁净实验室 * * 洁净实验室 偏差处理 当微生物监测结果超出警戒限度和纠偏限度时，应当按照偏差处理规程进行报告、记录、调查、处理以及采取纠正措施，并对纠正措施的有效性进行评估。 微生物鉴定 建议对受控环境收集到的微生物进行适当水平的鉴定 1、有助于预期常见菌群。 2、有助于评估清洁/消毒方法、消毒剂的有效性。 3、有助于污染源的调查，辅助OOS调查。 ? * * 洁净实验室 微生物鉴定 通则9205“药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则”建议对洁净室和其他受控环境分离到的微生物进行鉴定，以掌握环境微生物污染情况，有助于污染调查。 无菌试验结果阳性和无菌生产模拟工艺（如培养基灌装）失败时，对检出的微生物鉴定至少达到种属水平，必要时达到菌株水平。 * * 洁净实验室 微生物鉴定 借助现有的分类系统，通过对未知微生物的特征测定，对其进行细菌、酵母菌和霉菌大类的区分，或属、种及菌株水平确定的过程。 * * 洁净实验室 鉴定程序 —分离纯化 —初筛试验 —表型微生物鉴定 —基因型微生物鉴定（16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶链式反应、DNA-DNA杂交、焦磷酸测序、多位点序列分型等 ） * * 洁净实验室 分离纯化 纯培养物是指来源于同一单细胞的细胞群体 平板划线法是最常用的技术 * * 洁净实验室 初筛试验（革兰氏染色、芽孢染色、镜检观察细胞形态、重要的生化反应） 重要的生化筛选试验 —氧化酶试验：氧化酶阳性：不发酵的革兰氏阴性杆菌、 氧化酶阴性：肠道菌 —过氧化氢酶试验 阳 性：葡萄球菌 阴性：链球菌 —凝固酶试验 阳 性：致病性 阴性：非致病性 * * 洁净实验室 表型微生物鉴定 —培养物 （菌落形态、菌落颜色、形状、大小和产色素） —形态学（细胞形态、大小、形状、鞭毛、内容物、革兰氏染色、芽孢 和抗酸染色、孢子形成模式） —生理学（氧气耐受性、pH值范围、最适温度和范围、耐盐性） —生化反应（碳源利用、碳水化合物的氧化或发酵、酶的模式） —抑制性（胆盐耐受性、抗生素敏感性、染料耐受性） —血清学（凝集反应、荧光抗体） —化学分类（脂肪酸构成、微生物霉素、全细胞组分） —生态学（微