细胞培养技术及医学应用 4.体外培养细胞的生长方式 体外培养细胞的生长方式.ppt

动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁。 动物细胞倍增时间长，生长缓慢，易受污染。 培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪切力敏感。 动物细胞间主要以聚集体形式存在。 原代细胞一般繁殖50代左右即退化死亡。 动物细胞的培养特点： 小鼠心肌细胞原代培养 贴附和非贴附生长： 1.贴附型细胞：细胞间相互接触；细胞与细胞外基质（培养器皿壁或载体）结合。多数细胞属贴附型细胞。 1.非贴附型细胞或悬浮型细胞：此类细胞体外生长不必贴壁，可在培养液中悬浮生长。如：白细胞、淋巴细胞，肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞系等。 体外培养细胞的分型 贴附型细胞 悬浮型细胞 人卵巢成纤维细胞 哺乳动物大多数细胞必须附着固体表面生长。当细胞布满表面（单层）时，即停止生长。若取走一片细胞 ，存留的细胞就会沿着表面生长而重新布满表面。从生长表面脱落而进入液体的细胞通常不再生长而逐渐退化。（为单层附壁培养） 按培养细胞的形态，可分四类： 成纤维型细胞(fibroblast) 外形与体内成纤维细胞相似，梭形或不规则形。 细胞贴壁后呈梭形，胞质外伸出2-3个长短不 同的突起，成放射状，胞间疏松。起源于中 胚层的细胞在体外培养时一般表现为这种形式。 一、贴附型细胞(anchorage-dependent cell) 人卵巢成纤维细胞 2.上皮型细胞(epithelium)： 泛指形状上类似上皮细胞的细胞。特点：扁平状，形态较为规则。胞间紧密，单层贴壁。起源于内、外胚层的细胞体外培养时如此。 KINGSOFT RWPE2人前列腺上皮细胞 3.游走型细胞(wandering)： 类似巨噬细胞样的特征。外形不规则。分散生长，不连接成片，成群落；通常伸出伪足和突起，贴壁位置不固定，呈活跃的游走和变形运动。单核巨噬细胞系细胞体外培养常如此：颗粒性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肿瘤细胞。 淋巴细胞 形态上不规则（难以确定其形态）的细胞。细胞胞体略呈多角形；细胞胞突细长形；类似丝状伪足。如神经元和神经胶质细胞。 4.多形型细胞( polymorphic)： 神经元细胞 细胞的来源不同； 生理条件不同，功能状态不同； 血清成分、培养基成分、 添加成分、培养基的酸碱度、气象环境、温度等不同。 如HeLa细胞原本是一种上皮型癌细胞，但若在过酸或过碱的条件下培养，可以呈现梭形，当酸碱适中时又可以恢复上皮型特征。 影响细胞形态的主要因素 此类细胞体外生长不必贴壁，可在培养液中 悬浮生长。如：白细胞、淋巴细胞，肿瘤细胞 和杂交瘤细胞以及转化细胞系等。 形态：始终为球状 优点：细胞密度高，培养效率高，易操作控 制，便于大规模生长。 有些细胞既可悬浮，也可以贴附。 二、非贴附型细胞或悬浮型细胞 1.贴附： 细胞接种后很快形成伪足，与底物点接触，细胞渐呈放射状伸展，细胞体中心变扁平状。 影响因素：低钙不利于细胞伸展；低温和培养液流动过快妨碍贴附；生物因素：表皮生长因子（刺激神经胶质细胞的皱褶活动）、成纤维细胞生长因子（减少3T3细胞的扁平度）。 体外培养细胞的生长特性 2.接触抑制： 正常细胞移动、靠近而接触时，细胞不再移动且停止接触区质膜的皱褶活动和细胞运动以及细胞的重叠生长。肿瘤（癌）细胞无此现象。 形成原因：细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白，也叫做糖被，它在细胞上起识别作用。当细胞增殖到一定程度，也就是互相挨在一起的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖。