实验1紫外可见吸收光谱实验报告.pdf

实验一：紫外-可见吸收光谱 一、实验目的 1. 熟悉和掌握紫外-可见吸收光谱的使用方法 2. 用紫外-可见吸收光谱测定某一位置样品浓度 3. 定性判断和分析溶液中所含物质种类 二、实验原理 紫外吸收光谱的波长范围在 200~400 ，可见光吸收光谱的波长在 400~800 ，两者都属于电子能谱，两者都可以用朗伯比尔（Lamber-Beer’s Law ） 定律来描述 A=ε bc 其中A 为吸光度; ε为光被吸收的比例系数；c 为吸光物质的浓度,单位mol/L； b 为吸收层厚度，单位cm 有机化合物的紫外-可 见吸收光谱，是其分子中 外层价电子跃迁的结果， 其中包括有形成单键的 σ 电子、有形成双键的π 电 子、有未成键的孤对 n 电 子。外层电子吸收紫外或 者可见辐射后，就从基态 向激发态（反键轨道）跃 迁。主要有四种跃迁，所 需能量 ΔE 大小顺序为 σ→σ*n→σ*π→πn→π* 吸收带 特征 典型基团 σ→σ* 主要发生在远紫外区 C-C、C-H （在紫外光区观测不到） 跃迁一般发生在150~250nm，因此在紫 n→σ* -OH、-NH 2 、-X 、-S 外区不易观察到 跃迁吸收带 波长较长，孤立跃迁一般发 π→π* 芳香环 生在200nm 左右 n→π* 跃迁一般发生在近紫外区（200~400nm） C=O、C=S、－N=O、－N=N－、C=N ; 三、实验步骤 1、开机 打开紫外-可见分光光度计开关→开电脑→软件→联接→M （光谱方法）进 行调节实验需要的参数：波长范围 700-365nm 扫描速度 高速；采样间隔： 0.5nm 2、甲基紫的测定 （1）校准基线 1 将空白样品（水）放到比色槽中，点击“基线”键，进行基线校准 （2 ）标准曲线的测定 分别将5ug/ml、10ug/ml 、15ug/ml 、20ug/ml 甲基紫溶液移入比色皿（大 约2/3 处），放到比色槽中，点击“开始”键，进行扫描，保存 （3 ）测定试样 将试样甲基紫溶液移入比色皿（大约2/3 处），放到比色槽中，点击“开始” 键，进行扫描，保存 3、甲基红的测定 （1）校准基线 将空白样品（乙醇）放到比色槽中，点击“基线”键，进行基线校准 （2 ）测定试样 将试样甲基紫溶液移入比色皿（大约2/3 处），放到比色槽中，点击“开始” 键，进行扫描，保存 四、实验结果 1.未知浓度的测定 分别测定了5 μg/ml ，10 μg/ml ，15 μg/ml ，20 μg/ml 和未知浓度的甲基紫 溶液的紫外吸收光谱，紫外吸收谱图如下： 甲基紫在580nm 是达到最大吸收见下表： 浓度/ μg*ml-1 吸光度 5 0.665 10 1.274 15