硅胶柱层析技术[借鉴].pptVIP

精品PPT·编辑可用 精品PPT·编辑可用 精品PPT·编辑可用 精品PPT·编辑可用 配色花哨 文字多 套用模板 套用模板 逻辑不清 内容空洞 太土 太杂 太乱 太繁 “ ” 精品PPT·实用可编辑 硅胶柱层析技术 * 精品PPT·值得借鉴 常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。 其实硅胶柱层析技术也可以称作硅胶吸附柱色谱技术 * 精品PPT·值得借鉴 色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异，最后达到彼此分离的目的。 色谱法按固定相的状态可分为柱色谱、平板色谱和棒色谱三种，而实验室中最常用的是柱层析和薄层层析，以及它们之间的配合应用。 * 精品PPT·值得借鉴 柱层析 1、吸附色谱的原理 在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用主要是物理和化学作用两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力；化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。 2、操作步骤 2.1 硅胶准备 硅胶一般选用250-400目(即40-63μm直径的硅胶颗粒)，根据ΔRf选用硅胶的用量。 2.2 实验仪器准备 一支玻璃色谱柱,一个铁架台,烧杯,锥形瓶,径口直径较大的玻璃漏斗,一支玻璃棒, 等。 * 精品PPT·值得借鉴 2.3 装柱 2.3.1 吸附剂的加入 ①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。 ②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。 俟填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，即加试样溶液。 * 精品PPT·值得借鉴 2.3.2试样的加入 ①将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入。注意勿使吸附剂翻起。 ②或将试样溶于适当的溶剂中，与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。 * 精品PPT·值得借鉴 2.4洗脱 除另有规定外，通常按流动相洗脱能力大小，递增变换流动相的品种和比例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变流动相的品种和比例。操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。 2.5 检测 2.5.1 初步检测 当冲洗溶剂流出一定量后，可对流出液进行初步检测，并且将锥形瓶更换成小试管进行收集。一般只进行初步的快捷检测，因此通常是取一小薄层板，用铅笔和直尺将硅胶板分划成多个小方块，并按一定的次序编号。取一根内径为0.3mm左右的玻璃毛细管蘸取少量流出液，点于薄层板的一个小格内，待半点干后，然后用物理的或化学的方法检测。 * 精品PPT·值得借鉴 2.5.2 正式检测 ①点样: 取分部收集的冲洗溶液进行分别直接点样,如果冲洗溶液太稀,浓度太小,可先浓缩.点样的容器一般用玻璃毛细管,点样斑点的直径一般为3-5mm. ②展开:在普通的展开槽中进行,展开方式常选用上行展开. ③展开剂:使用冲洗溶液. ④显色:一般常用物理检测法和化学检测法.物理检测法中首先有紫外光法,紫外光常用两种波长(254nm与365nm).其次是碘蒸气显色法.化学检出法通常惊醒显色剂直接喷雾.显色剂有通用显色剂和专用显色剂.通用显色剂最常见的是硫酸-乙醇或甲醇(1:1)溶液,喷雾后,有的化合物立即反应,但多数化合物需加热后经历数分钟才显色,不同化合物的反应不同,所以颜色也往往不同.专用显色剂是指对某个或某一类化合物显色的试剂,利用化合物本身的特有性质,或利用其所含的某些官能团的特殊反应.展开后根据斑点的,可以粗略的估计待分离物的含量的大小. * 精品PPT·值得借鉴 2.6 合并 根据上面薄层检测的结果,我们可以将具有相同Rf值的部分进行合并,然后利用旋转蒸发器对合并部分进行旋转蒸发,最后得到我们需要的目标产物. 2.7色谱柱的洗涤 在绝大多数情况下,硅胶分离柱中的硅胶是一次性使用,但在使用后的色谱柱中由于还含有冲洗溶剂,所以要将里面的硅胶到出是比较困难的.取出硅胶的一种方法是将该柱放置一段时间,让溶剂自然挥发完后,倒出硅胶.但这种方法既费时又污染