721分光光度计作业指导书.doc

分光光度计的使用 光的本质是电磁波。不同的光，有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可 见光，波长范围在 400-750nm，小于 400nm 的光线为紫外线，大于 750nm 的光线称为红外线。 光线通过透明溶液介质时，一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液后光波部分减少。这种光波的吸收和透过可用于物质的定性定量分析。吸光分析依据的是 Lambert 和 Beer 定律。 一、 Lambert 定律 一束单色光通过透明溶液时，一部分的光波被吸收，被吸收光波的量与溶液厚度有一定比例关系。 I = I0e-al,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ⑴式中 I0 为入射光强度 为通过溶液后的光强度 为溶液的径长 e 为自然对数的底，即 2.718 为溶液的吸光率（ 1）式可改写为： ln（I0/I ）= al,,,,,,,,,,,,,, (2)将 （ 2）式换算成常用对数式，即 log（I0/I ）= 0.43al· K = 0.43a· log（I0/I）= Kl,,,,,,,,,,,,,,, 1 / 7 (3) 此处以 K 为吸光率。二、 Beer 定律 以溶液中溶质浓度变化代替溶液厚度的改变，光波的吸收与溶质浓度的改 变有类同的关系。即一束单色光通过溶液时，光波被溶液吸收一部分，吸收多 少与溶液中溶质浓度有一定比例关系。依据 Lambert 定律中同样的推导，可得 出下式。 log（I0/I ）= KC,,,,,,,,,,,,,, (4)式中 c 为溶液中溶质的浓度。 Lambertp 定律和 Beer 定律合并，即 (3)和 (4)式合并为 log（I0/I ）= KCl,,,,,,,,,,,,,,,, (5)令 T =（I/I0 ） A = log（I0/I） A = KCl,,,,,,,,,,,,,,,,,,, (6) 式中 A 为吸光度， T 为透光度 (6)式为 Lembert-Beer 定律的物理表示式，其含义为： 一束单色光通过溶液后，光波被吸收一部分，吸收多少与溶液中的溶质的浓度和溶液厚度成正比。此式为吸光分析法的基本计算式。 三、 721A 型分光光度计仪器介绍 目前科研和临床最常用的分光光度仪器（可见光区）是 721 分光光度计。 2 / 7 721A 型分光光度计采用自准式光路，单光束方法。光谱范围在 360～ 800nm。 以钨丝灯泡为光源，经透镜聚光后射入单色器内，再经棱镜色散后，反射到准直镜，穿狭缝得到波长范围更窄的光波作为入射光，进入比色池透出的光波被光电管接受，产生光电流。经微电流放大器送至对数放大器，由对数放大器变换成常用对数值输出，再送至浓度调节器，数字面板表面通过切换开关分别选择微电流放大器的输出、对数放大器的常用对数输出及浓度调节器的输出信号进行透射比（ T）、光密度（ A）和浓度（ C）的显示。 下面分别简述仪器主要部件，并附 “结构示意图 ”和“仪器外形图 ”。1.光源： 以 12V25W 卤钨灯泡为光源。 2.单色器组件： 包括光缝片（园弧形的两片）、棱镜、准直镜、凸轮、波长盘、入射光与出射光调节部件等。是仪器的主要部件之一。 3.试样 xx（比色皿）： 进光婧统龉饷娼杂晒庋 РＡе瞥桑 约跎俟獾纳 ⑸洌 殖置嫖 煌腹獾拿ＡА１壬 蟮墓娓裎 ?SPANlang=EN-US0. 5、1、 2、3 厘米 4 种。 4.受光器： 不是光电比色计的光电池而是光电管。它的阴极表面有一层对光灵敏的物质，光照射到光电管后，会发射出光电子，此光电子向阳极运动，形成光电流。光电管的灵敏度虽比光电池小，但经光电管出来的光电流可以放大，而经光电池出来的光电流不易放大，并且光电池易疲乏，故较高级的分光光度计均采用光电管作受光器。 5.检测系统： 3 / 7 包括对数放大器，浓度调节器和数字面板显示表。【实验准备】一、器材 1.擦镜纸或棉花、滤纸片。 2.1 厘米的比色皿，铺有滤纸的表面皿或培养皿。 3.220V 交流电源，外接地线牢固。 4、721A 型分光光度计，配有仪器布罩。 二、试剂 1.蒸馏水或空白试剂（ B）。 2.不同浓度的同种颜色透明溶液两份，用作标准液（ S）及待测液（ U）。 【实验操作】 1.检查 721A 型分光光度计的旋钮和开关，使其回复零点。 2.按要求接通电源，按下 “T键”，打开暗盒盖和电源开关，指示灯亮。预热 分钟。 3.调节波长旋钮至所需波长。 4.取比色皿分别盛装 B、S、U 液，置入检测室（比色皿先用蒸馏水洗后，再用比色液润洗才能装比色液）。 B 液对准光路。 5.调节面板 “零位细调 ”，使指示为 00.0，即透射比 “ T的”零点，同时 “一”号闪 跃。 6.合下检测室盖 .调节 “光量粗、细调 ”电位器，使指示为 100.0，须反复 5、6 两点操