现代分析技术与应用：第十章 紫外-可见分光光度法.ppt

（一）吸光系数法 （二）工作曲线法 E通常来源于标准数据（?max 的?或 ），简单。如不能在?max处测定A，则须测定标样在?处的E值。 测定E值的仪器与工作仪器不是同一台时，误差不容忽视。 同一台仪器上工作，固定测试条件，有： A=K?c，浓度与吸收度呈线性关系 例：芦丁含量测定 0.710mg/25mL （三）对照法——外标一点法 同一台仪器（误差小）上工作，固定测试条件，则： 应用：一元弱酸HA离解平衡常数的测定 在高酸性（或高碱性）溶液中： 或 溶液酸度在两者之间时： 根据吸光度的加和性，则： 例：测定维生素B6的pKa值 称取VB625mg，溶于水后稀释至100ml，作为贮液。供试液按下表制备成pH各不相同但含B6浓度相同的溶液。VB6在pH2时为酸式体，在pH7时为碱式体。 将溶液A（酸式体）和溶液E（碱式体）分别置于1cm吸收池中，在230~375nm波长范围内扫描。重叠两个吸收光谱，选择适当的测定波长， 溶液 VB6贮液 V(ml) 0.1mol/mL HCl V(ml) 0.05mol/mLNaAc V(ml) pH7磷酸盐缓冲液V(ml) V总 A 10.0 10.0 0 0 100.0 B 10.0 6 25 0 100.0 C 10.0 4 25 0 100.0 D 10.0 2 25 0 100.0 E 10.0 0 0 50 100.0 四、同时测定多组分的定量方法——计算分光光度法 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分可在互不重叠下选择λ测定A，分别按单组分定量。 2．两组分吸收光谱部分重叠 ?1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca ?2→测→a组分干扰 3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定 （1）解线性方程组法 2．等吸收双波长法 消除a的影响测b 选 的等吸收点，得 和 同理： 消除b的影响测a ∵ A A A A A ∵ ∴ A A A A A A1 A2 五、紫外吸收光谱用于有机化合物分子结构研究 （一）有机化合物的紫外吸收光谱 有机化合物的紫外吸收光谱特征取决于：分子中的生色团、助色团、共轭情况。 单纯的紫外光谱不能确定化合物的结构，必须与IR、MS、NMR相配合，但可以用来推定分子的骨架、判断生色团之间的共轭关系、估计共轭体系中取代基的种类、位置和数目。 1. 饱和碳氢化合物： ? → ?* 跃迁，λ150nm（远紫外区），在紫外吸收光谱中常用作溶剂。 2. 含孤立助色团和生色团的有机化合物： -OH， -OR， -NH2，-X等，n → ?* 跃迁，吸收峰红移。 生色团： π→π*跃迁；杂原子双键： π→π*、 n→π*、 n→ ?*跃迁。 3. 共轭烯烃：两个孤立双键吸收峰位置与单个双键吸收峰位置相同，吸收强度约增加1倍； 共轭双键，降低π与π*能级差，吸收峰长移。共轭体系增加， π到π*跃迁所需能量减小，吸收峰长移增加， ?增大，化合物由无色逐渐变为有色。 4. α,β不饱和酮、醛、酸和酯：π → π*，由200nm长移至200-260nm; n→ π*,由280nm长移至310-350nm。 羧酸和酯的羰基碳直接连接助色团，共轭作用下， π和π*轨道能级均升高，但成键升高更大，使得吸收峰长移；n轨道能级未变，n→ π*吸收峰短移。 5.芳香族化合物： （1）苯和取代苯：苯：E1、E2、B三个吸收带。B带是芳香化合物特征；取代苯：三个带都长移， ?增大。芳环有生色团取代时，出现K带；苯甲醛等，K、B、R带。 （2）芳杂环化合物： 五元不饱和杂环化合物：呋喃、噻吩、吡咯，无n→ π*跃迁；六元氮芳杂环，如吡啶，有n→ π*跃迁。 （二）有机化合物结构的研究： 1.从吸收光谱中初步推断基团：210-250nm，可能含有两个共轭单位；260-300nm，3-5个共轭单位； 250-300nm弱吸收，羰基存在；250-300nm中等强度吸收，苯环存在；化合物有颜色，分子中共轭生色团一般在5个以上。 2.异构体的推定： （1）结构异构体：如松香酸和左旋松香酸。 （2）顺反异构体：如顺反1，2-二苯乙烯。 3.化合物骨架的推定： 未知化合物与已知化合物的UV一致时，可以认为两者具有同样的生色团。 六、比色法——可见分光光度法 使无吸收的物质转变为有色物质，便于测定。 （一）显色反应及其条件 1. 对显色反应的要求 ① 显色反应必须是定量的；② 反应的有色产物必须有足够的稳定性；③ 产物与试剂的最大吸收峰必须有足够的差别；④ 产物的?值必须足够大（103~105）；⑤ 显色反应必须有较好的选择性。 2. 反应的条件 必须通过实验确定显色反应的最适宜条件，须注意： ⑴ 试剂用量对产物组成