现代分析技术与应用：第十七章 气相色谱法.ppt

（3）内标对比法 校正曲线的截距近似为零，y=kb 在对照品溶液和待测溶液中，分别加入相同量的内标物，配成对照品液和供试液，分别进样，按下式计算待测组分浓度： 定量分析 内标法(Internal standard method) 4.标准加入法(Standard addition method) 在供试液中加入一定量待测组分i的对照品（△mi ），测定增加对照品后组分i峰面积的增量（△Ai ），按下式计算组分i的含量。 为消除进样误差，可在供试品色谱图中选择一个参比峰（r），以Ai/Ar代替Ai，则： 定量分析 内标法(Internal standard method) * * 第四节 色谱条件选择 塔板理论：固定长度，塔板高度越小，塔板数越多，分离效果越好 速率理论： 塔板高度 涡流扩散项 纵向扩散项 传质阻抗项 H = A + B/u + Cu 影响H 的动力学因数 涡流扩散： 柱填充不均匀使同一个组分分子经过不同的长度途径流出色谱柱 气相色谱中： 填充柱气相色谱：60-80目或80-100目 空心毛细管柱：无 色谱条件选择 气相色谱速率理论 A=2?dp 浓度梯度的存在造成的区带展开 纵向扩散（longitudinal diffusion，分子扩散， B/u) B=2?Dm 色谱条件选择 气相色谱速率理论 B: D, 组分性质，载气种类，柱温，柱压 u：载气平均线速度 提高柱效： 较低的柱温，较高的载气流速 u低时，用相对分子质量大的氮气 u高时用氦气或氢气 传质阻抗(mass transfer resistance) ：影响传质过程的阻力。组分分子与固定相或流动相分子间相互作用的结果 气相传质阻抗和液相传质阻抗 组分——气液面——固定液——分配平衡——气液面 影响因素：固定相液膜厚度、载气流速 色谱条件选择 气相色谱速率理论 总结： 载体颗粒度 色谱柱填充均匀度 载气种类和流速 固定液液膜厚度 柱温 色谱条件选择 气相色谱速率理论 互相制约，综合考虑，不断尝试 色谱条件选择 分离方程式： 实验条件的选择 色谱分离的前提：R≥1.5 影响塔板高度的速率理论： 固定液、柱温、载气 柱效n, 分离因子α=k2/k1， 保留因子k 固定相选择 见第二节. 2. 载气 低线速时，用N2 高线速时，用H2或 He 用TCD时，使用H2或 He可提高灵敏度 色谱条件选择 实验条件的选择 3.柱温：影响分离的最重要条件。 柱温降低，分离度提高，但峰宽增加，分析时间加长。 选择原则： 良好分离，时间适宜，峰形对称,尽量用低柱温。 色谱条件选择 实验条件的选择 恒温: 分析过程中柱温保持不变 程序升温(temperature programming): 在一个分析周期中，柱温按照一定程序改变 该法适用于复杂组分（如宽沸程样品、极性差异大的样品）分析,有利于性质差异大的组分达到合适的分离度。 色谱条件选择 实验条件的选择 最初温度：50°，运行三分钟后，以每分钟15°的速度升温，升到260后保持20分钟。 色谱条件选择 最初温度：50°，运行三分钟后，以每分钟15°的速度升温，升到260 °后保持20分钟。 调整实验条件提高分离效率或节约能源 假设：化合物A保留时间11min, 化合物B保留时间12min,分离度R1.5 化合物A出峰时温度约为140度，化合物B出峰时温度约为155度 提高分离度的重点：缓慢升温。每分钟5°程序升温。 节约能源：提高最初温度，降低最终温度，80 °或100 °为起始温度。180 °或200 °为最终温度，且无需保持20分钟。 实验条件的选择 例：等温和程序升温对分离效果的影响 4. 柱长 达到分离度要求下尽量缩短柱长 5.其他条件 (1)进样口温度：应保证样品瞬间气化 (2)检测器温度: 高于柱温20-50 ℃ (3)进样时间及进样量：快速 色谱条件选择 实验条件的选择 1. 分解法 ? 热裂解法: 适用于高聚物等大分子分析 ? 水解法: 将大分子水解成小分子,蛋白质水解成氨基酸 2. 衍生化法 ?酯化(esterification): -COOH-----COOR ?硅烷化(silanization): -OH------O-Si(CH3)3 -COOH------COOSi(CH3)3 -NHR------NRSi(CH3)3 ?酰化(acylation): -OH------OCOR -NH2-------N