现代分析技术与应用：第二十一章 色谱联用分析法.ppt

高效液相色谱－质谱联用 分离 分析结构 高效液相色谱 质谱 接口装置 满足液、质两谱在线联用的真空匹配要求 实现被分析组分的离子化 高效液相色谱－质谱联用 组成 离子化方式 试样在离子源中以气体形式被离子化 固体表面或溶液中溅射出带电离子 分类： 电喷雾离子化（ESI） 将溶液中试样离子转化为气态离子 大气压化学离子化 (APCI) 将溶液中组分的分子转化为气态离子 大气压光离子化 (APPI) 高效液相色谱－质谱联用 组成 带电液滴的形成 溶剂蒸发和液滴碎裂 离子蒸发形成气态离子 电喷雾接口示意图 高效液相色谱－质谱联用 电喷雾离子化（ESI） 电喷雾离子化过程示意图 高效液相色谱－质谱联用 电喷雾离子化（ESI） HPLC-ESI-MS谱图 准分子离子的相关信息，如[M+H]+、[M+Na]+、[M－H]?等 生物大分子如蛋白质、肽等，可产生多电荷离子。 常用于强极性、热不稳定化合物及高分子化合物的测定 缺点：只允许非常小的流动相流量 高效液相色谱－质谱联用 电喷雾离子化（ESI） 大气压化学离子化接口 将溶液中组分的分子转化为气态离子 适用范围: 一定挥发性的中等极性与弱极性，相对分子质量在2000以下 优点: 1.HPLC与MS匹配度高, 2.允许使用流速高及含水量高的流动相， 3.极易与RP-HPLC条件匹配。 4.与ESI相比，对流动相种类、流速及添加物的依赖性较小 高效液相色谱－质谱联用 优点: HPLC与MS匹配度高 允许使用流速高及含水量高的流动相， 极易与RP-HPLC条件匹配 与ESI相比，APCI对流动相种类、流速及添加物的依赖性较小 大气压化学离子化接口 高效液相色谱－质谱联用 质量分析器 四极质量分析器(使用较广泛 ) 离子阱质量分析器 飞行时间质量分析器 高效液相色谱－质谱联用 色谱柱:短柱，以缩短分析时间， 常用固定相:ODS。 流动相的基本要求: 不含非挥发性盐类，以防其析出堵塞毛细管等,色谱纯 流动相中挥发性电解质如甲酸、乙酸、氨水、乙酸铵等的浓度也不能太高。 流动相的pH、流速均对检测灵敏度有很大影响 高效液相色谱－质谱联用 色谱单元 特点 适用范围宽。 可产生准分子离子和多级质谱可提供丰富的结构信息 高灵敏度及样品通量。 可在色谱分离不完全的情况下对复杂基质中的痕量组分进行快速定性和定量分析 高效液相色谱－质谱联用 特点和应用 色谱－质谱 色谱-质谱联用分析扫描模式 全扫描（full scanning） 选择离子监测(SIM) 选择反应监测(SRM) 扫描模式及提供信息 质量分析器在给定的时间范围内对给定质荷比范围进行无间断地扫描，获得样品中每一个组分（或在某一特定时刻）的全部质谱。 可提供各种定性和定量信息。 扫描模式 全扫描 总离子流色谱图（TIC） 总离子流强度随时间（扫描次数）变化的色谱图 对应某一时间点的峰高是该时间点流进的组分的所有质荷比的离子强度的加和 扫描模式 全扫描 质谱:将全扫描得到的分子离子 或准分子 离子（[M+H] +、[M－H]?、[M+Na]+等）及所有碎片离子的质荷比与其对应的离子流的相对强度作图 给出总离子流色谱图上每一个色谱峰的质谱 扫描模式 全扫描 第二十一章 色谱联用分析法 色谱与质谱、波谱联用分析法 提高定性能力 色谱联用分析法 色谱-色谱联用分析法 提高分离能力 色谱-质谱、波谱联用分析法 分离 分析结构 色谱－质谱联用分析法 气相色谱－质谱联用 GC-MS 高效液相色谱－质谱联用 HPLC-MS 毛细管电泳－质谱联用 CE-MS 气相色谱－质谱联用 GC的试样及流动相均为气态，与质谱仪的进样要求相匹配，故最易将这两种仪器联用 原理 分离试样中各组分 气相色谱仪 接口 适配器 质谱仪 气相色谱仪的检测器 计算机系统 获得色谱和质谱数据 气相色谱－质谱联用 原理 色谱单元、质谱单元、接口 作用： 联接色谱与质谱 除去载气、降低气相色谱仪柱后流出物的气压 富集试样，并把组分送到质谱仪的离子源 接口(interface)：实现联用的关键 气相色谱－质谱联用 组成 要求： ①色谱分离后组分尽可能多地进入质谱仪，载气尽可能少地进入质谱系统。 ②维持离子源的高真空。 ③组分应不发生化学变化。 ④对试样的有效传递应具有良好的重现性。 ⑤操作应简单、方便、可靠。 ⑥尽可能的短,以使试样尽可能快速通过接口。 气相色谱－质谱联用 组成 直接导入型 装置结构简单，容易维护，但它无浓缩作用 喷射式浓缩型具备去除载气、浓缩样品的功能，即具有分子分离的能力  气相色谱－质谱联用