现代分析技术与应用：第十九章 平面色谱法.ppt

相对比移值(relative Rr) 被测组分与参考物质的比移值比。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系统误差 (一）平面色谱法的参数 定性参数 相平衡参数 分配系数 K= Cs/Cm 容量因子 k K、k与Rf值的关系： 1、不同物质热力学常数K不同，Rf值不同，平面色谱显示不同的斑点 2、0.01K100 3. 利用公式,可进行Rf, K之间的互相换算. (一）平面色谱法的参数 结论： 第二节 薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC) 过程: 固定相或载体涂于薄板并活化 点样 密闭容器内用适当溶剂展开 显色后斑点比较 含量测定 定性鉴别 特点： 快，需十至几十分钟，同时展开多个试样 试样预处理简单，对试样限制少 上样量比较大，适用于制备(有条件) 仪器简单，操作方便 灵敏度较高(直观) 第二节 薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC) （一）薄层色谱法的主要类型和原理 吸附薄层色谱法 原理：组分在薄层板上反复(吸附-解吸附)的过程。 前提:各组分吸附系数不等 　一般极性强的组分K大，Rf值小；极性弱的组分 K小，Rf值大。 分配薄层色谱法: 原理：根据分配系数（溶解度）不等多次分配实现分离 分类： 正相色谱：水为固定相（硅胶载体），有机溶剂为流动相。极性强的组分K大， Rf值小。 反相色谱：烷基化学键合相为固定相，水-有机溶剂为流动相。极性强的组分K小，Rf值大。 （一）薄层色谱法的主要类型和原理 （二）吸附薄层色谱的吸附剂 1、吸附剂 (1）硅胶：多孔性无定形粉末，表面带有硅醇基而呈弱酸性 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附性）。组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等 问题: 胺类等碱性物质是否可以点TLC? 硅胶类吸附剂的分离效率: 1、含水量高，活性级高，活度低。 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高） 2、粒度越小，越均匀，分离效率越高。 常用硅胶： 硅胶H，不含黏合剂 硅胶G，含煅石膏 硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景(最常用) （二）吸附薄层色谱的吸附剂 （2）氧化铝 碱性氧化铝(pH9.0) 分离中性或碱性化合物，如生物碱、脂溶性维生素等； 中性氧化铝(pH7.5) 分离酸性及对碱不稳定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0) 酸性化合物的分离。 活性与含水量有关，含水量越高，活性越弱。 （二）吸附薄层色谱的吸附剂 氧化铝和硅胶含水量与活性的比较 硅胶含水量% 活性级 氧化铝含水量% 0 Ⅰ 0 5 Ⅱ 3 15 Ⅲ 6 25 Ⅳ 10 38 Ⅴ 15 （二）吸附薄层色谱的吸附剂 聚酰胺是由酰胺聚合而成的高分子物质。常用的是聚已内酰胺 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 C O ‖ N H n 聚酰胺可分离极性和非极性物质 如黄酮、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。尤其是对黄酮、酚类、醌类等物质的分离，远比其他方法优越。 （3）聚酰胺 （二）吸附薄层色谱的吸附剂 展开剂 选择原则： 根据被分离物质的极性 Stahl简图： 极性物质—活度低（活性级大）的吸附剂--极性展开剂 　 （二）吸附薄层色谱的展开剂 混合溶剂 1、单一溶剂展开 2、Rf值太小，则加入极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等 3、Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等) 4、加入少量酸、碱可抑制某些化合物斑点拖尾，使斑点集中。 5、展开剂中加入中等极性的溶剂（如丙酮）可使不相混合的溶剂混溶、降低展开剂黏度。 （二）吸附薄层色谱的展开剂 2、展开剂(流动相) 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 （二）吸附薄层色谱的展开剂 （三）薄层色谱操作方法 制板　均匀 点样　集中 展开　(多种方式) 预饱和 显色　 展开 薄层色谱中的展开是在一个具有一定空间和形状的密闭容器中，流动相沿薄层（固定相）运动。 直立双槽色谱缸 卧式色谱槽 圆形色谱缸 （三）薄层色谱操作方法 展开方式 ↑ → ↖　↗ ↙　↘ ↑↑ ↑ （三）薄层色谱操作方法 展开过程中注意溶剂蒸气饱和 边缘效应？ 产生原因？ 防止边缘效应？ 展开剂的蒸气饱和程度影响样品的色谱行为，尤其在使用混合溶剂时更为突出。 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的