现代分析技术与应用：第十九章 平面色谱法 (2).ppt

（三）薄层色谱操作方法 定性分析 应用2：常采用已知标准物质对照（同一板上展开），多种展开系统的Rf值与对照品一致。 （三）薄层色谱操作方法 定性分析 应用3：与文献中已知物质的相对比移值进行比较定性 应用4：斑点与显色剂反应生成有色斑点初步推断化合物类型 应用5：杂质检查和主组分自身对照 （三）薄层色谱操作方法 定性分析 洗脱法 薄层色谱分离选用合适溶剂将斑点中组分洗脱下来。再用适当的方法定量测定。 斑点需预先定位 常用： 定量分析 薄层色谱法 展开——确定物质组分——选择需要物质——刮下所需色带硅胶粉——乙酸乙酯等溶剂洗脱硅胶粉——除去溶剂得分离后产物 直接定量法 1.目视比较法 与已知浓度对照品容易比较，斑点颜色深度或面积大小 2.薄层扫描法 扫描斑点对光吸收的强弱 薄层色谱法 定量分析 薄层色谱扫描法： 用一定波长的光束照射展开后的薄层板，测定薄层色谱斑点的吸光度A（或荧光强度F）随展开距离a的变化，所记录的A-a（或F-a）曲线 利用薄层扫描图进行定量及定性分析 常用：双波长薄层扫描仪 薄层扫描法简介 λs 选用被测组分的最大吸收波长， λR选用不被被测组分吸收的波长（薄层板的空白吸收）。 由于从测量值中减去了薄层本身的空白吸收，所以在一定程度上消除了薄层不均匀的影响，使测定结果准确度提高。 双波长法扫描 薄层扫描法简介 图16-10 双波长双光束薄层扫描仪 图16-11 双波长测定法 L：光源 MC：单色器 CH：斩光器 ①、②为单波长扫描曲线 P：薄板 PM：光电检测器 ③为双波长扫描曲线 薄层扫描法简介 双波长法扫描 扫描方法 透射法与反射法 线形扫描　曲折形扫描　 薄层扫描法简介 薄层扫描法简介 散射参数的选择 荧光测定法 定量分析法 薄层色谱 判断反应终点，监视反应过程。 各种天然和合成有机物的分离和鉴定，有时也可用于小量物质的精制。 可用于药品质量监控中药物纯度测定及降解产物检查。 鉴别中药和中成药有效成分及进一步含量测定。 固定相 纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相 流动相 含水的有机溶剂 原理 依据分配系数的不同而达到分离，属于正相分配色谱 第三节 纸色谱法 概述 比移值Rf表示组分在色谱中的位置 分配系数：与化合物的分子结构、流动相的种类、极性有关。 流动相一定： 极性越大或亲水性越强，分配系数越大，Rf越小。 纸色谱法 分离原理 实验条件 色谱纸的选择 1、滤纸质地均匀，有机械强度 2、松紧适宜 3、纸质纯，无明显荧光斑点 4、Rf值相差很小的化合物，慢速滤纸，反之则快速滤纸 5、制备或定量，用厚纸 纸色谱法 固定相 滤纸纤维，20-25%水分，6%-7%水以氢键缔合形式与纤维素的羟基结合。 特殊物质需预处理 酸碱物质分离：pH缓冲液中浸渍 弱极性物质：甲酰胺等有机溶剂内浸渍，降低固定相极性。 纸色谱法 实验条件 展开剂的选择 增加展开剂中极性溶剂的比例量，可增大Rf值 增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可减少Rf值 常用的展开剂：水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等 操作步骤：点样、展开、显色、定性定量分析 纸色谱法 实验条件 小 结 比移值及其与K和k的关系、相对比移值 吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及其选择 薄层色谱定性方法 纸色谱法：原理和实验条件 色谱类型 分离原理 载体 固定相 流动相 Rf顺序 吸附薄层色谱 吸附 ? 硅胶 有机溶剂 极性小的Rf值大 正相薄层色谱 分配 硅胶 水 有机溶剂 极性小的Rf值大 反相薄层色谱 分配 硅胶 硅胶键合相 水-有机溶剂 极性小的Rf值小 纸色谱 分配 滤纸 水 水-有机溶剂 极性小的Rf值大 小 结 比移值(Rf值) 溶质移动距离与流动相移动距离之比 定性的基本参数 (一）平面色谱法的参数 被分离物质的结构和性质 平面和展开剂的性质 温度 展开剂蒸气饱和程度 重现性差 影响因素 定性参数 a、b为原点至斑点中心的距离， C 为原点至溶剂前沿的距离 Rf： 0-1之间Rf=0, 组分在固定相上完全保留Rf=1, 组分在固定相上完全不保留 (一）平面色谱法的参数 定性参数 最佳范围 0.3-0.5 可用范围 0.2-0.8 (一）平面色谱法的参数 定性参数 相平衡参数 分配系数 K= Cs/Cm 容量因子 k K、k与Rf值的关系： 1、不同物质热力学常数K不同，Rf值不同，平面色谱显示不同的斑点 2、0.01K100 3. 利用公式,可进行Rf, K之间的互相换算. (一）平面色谱法的参数 结论： (一）平面色谱法的参数 分离参数 平面色谱法参数 色谱法概论参数 比移值Rf 保留时间 相平衡（分