临床免疫检验技术 第一单元 凝集试验和静脉标本采集 免疫凝集试验.ppt

实验目的 采用红细胞作为凝集试验的抗原，创造条件设法使相邻的红细胞靠近、聚拢、凝集从而达到对红细胞不完全抗体的检测目的。 问题背景资料 抗体与相应抗原结合后，在适宜的介质参与下可出现可见的抗原抗体反应。但有些分子较小的7S的IgG类抗体，体积小，长度短，在适宜介质中与相应抗原结合后不出现可见反应，这种抗体称为不完全抗体，如抗红细胞Rh抗原的抗体等，这种抗红细胞不完全抗体的存在是引起输血不良反应的主要原因之一，有必要设计检测不完全抗体，特别是针对红细胞抗原不完全抗体的的检测方法。 实验设计的策略 不完全抗体只含有一个抗原结合位点，?能与相应抗原结合，但不产生可见反应，因此也称单价抗体 。 抗红细胞不完全抗体与红细胞结合后，因抗体分子小，不能有效地连接红细胞，仅使红细胞处于致敏状态，而不出现可见的凝集反应。 在实验设计时，基本的思路是采用红细胞作为凝集试验的抗原，创造条件设法使相邻的红细胞靠近、聚拢、凝集从而达到对红细胞不完全抗体的检测目的。 实验方案讨论 凝集反应可分为哪两个阶段？其中可见反应阶段主要受哪些因素影响？可否根据影响因素，通过设置低离子强度介质以降低红细胞的Zeta电位和加入高价阳离子盐类以中和红细胞表面负电荷等来促使红细胞凝集？此时又如何判断是特异性凝集还是非特异性凝集？ 红细胞表面的不完全抗体是IgG，即免疫球蛋白，此时若在反应体系中加入抗人球蛋白，会出现何结果？抗人球蛋白如何制备？ 如何检测血清中未与红细胞结合和与红细胞结合的不完全抗体？ 免疫凝集分析系统——全自动血型分析系统 （临床见习） 基本原理 全自动血型分析系统采用柱凝集血型诊断系统试剂卡技术和数字图像处理技术自动实现人血样本的体外免疫血液检测。 ABO/Rh 血型诊断试剂卡是基于独特的柱凝集技术原理而设计的。该卡是在一种特制的塑料卡上设计有6个微柱，每个微柱中均装有一定数量具有分子筛作用的玻璃珠，并分别预置了抗A、抗B、抗D特异性抗体的试剂。当受检者红细胞进入测试柱与相应抗体反应并经低速和高速双相离心后，发生凝集的红细胞被阻滞在玻璃珠的上层（阳性），而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠介质之间的间隙沉积于柱的底部（阴性）。由此可将凝集红细胞与未凝集红细胞分开，达到鉴定ABO/Rh血型的目的。 见习内容与要点 全自动血型分析系统 了解该分析系统的整体结构和工作性能 掌握人血样本体外免疫血液自动检测的基本原理 熟悉整个操作流程 本实验以AutoVue＠全自动血型分析系统用于人红细胞ABO/Rh血型的正定型为例进行介绍 整体结构 计算机 打印机 不间断电源(可选) 储液桶 试剂卡 AutoVue Innova 样本的识别与加样 红细胞混悬与制备 试剂的识别与分配 孵育 离心 结果的阅读与解释 试剂卡的保存与移动 AutoVue Innova 的功能 AutoVue Innova 的检测菜单 ABO/Rh 定型 ABO反定型 Rh 表型鉴定 病人/ 献血员主侧与次侧交叉配血 抗体筛选 抗体鉴定 直接抗人球蛋白实验 酶实验 特殊血型抗原鉴定 质控实验 柱凝集血型诊断系统试剂卡 每张卡上有六个微柱 微柱内装有一定数量、大小均一的玻璃珠和分别预置了含抗A、抗B、抗D特异性抗体 受检者红细胞进入测试柱与相应抗体反应经低速和高速双相离心，发生凝集的红细胞被阻滞在玻璃珠的上层（阳性），而未凝集的游离红细胞则会通过玻璃珠介质之间的间隙沉积于柱的底部（阴性）,达到血型鉴定的目的。 用于人红细胞ABO/Rh 血型正定型的原理 微柱凝胶试验示意图 标本采集和要求 血液的采集 用真空采血针取肘静脉血3ml放入含有干燥抗凝剂的抗凝管中，并做好标识。 采集后的标本可室温保存4小时，并在6小时内测定。 见习内容 五号柱：抗-B试剂 四号柱：抗-A试剂 ABO-Rh血型诊断试剂卡 故每一试剂卡可用于2份人血标本ABO/Rh鉴定 一号柱：抗-A试剂 二号柱：抗-B试剂 三号柱：抗-D试剂 (抗-RH1) 六号柱：抗-D试剂 (抗-RH1) 全自动血型分析系统基本技术流程图 技术流程 样本装载量:42个试管位，36个位于可移动的扇形架中，6个固定位置 独立的样本装载门,主要处理区域的操作不会受到干扰而中断 样本加样 患者样本放置在仪器正面的一扇门后面，位于AutoVue的左边，由移液探针执行样本吸取并将样本输送到检测区这一步骤，请参见黄色线描出的部分。 样品装载意示 AutoVue可以自动进行结果的读取与分析, 自动读取器在系统内部离心机所在位置附近 读取试剂卡两面的信息高清晰度图像处理系统