动物生物化学课件 动物生化第二章2.ppt

（2）与茚三酮反应 茚三酮在弱酸中与α-氨基酸共热，引起氨基酸的氧化脱氨，脱羧反应，最后，茚三酮与反应产物－氨和还原茚三酮反应，生成紫色物质（λmax=570nm）。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。Pro、Hy-Pro与茚三酮反应直接形成黄色化合物（ λmax=440nm） 肽（peptide）：一个氨基酸的?-羧基和另一个 氨基酸的?-氨基脱水缩合而成的化合物。 肽键（peptide bond）：氨基酸间脱水后形成的 共价键称肽键（酰胺键）。 肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。 B.中文名称：丝氨酰甘氨酰酪氨酰丙氨酰亮氨酸 C.三字母写法： Ser-Gly--Tyr-AlaLeu或 D .单字母写法：ＳＧＹＡＬ 3、? 天然存在的活性肽 （1）?? 谷胱甘肽(glutathione, GSH) Glu—Cys—Gly红细胞中的巯基缓冲剂。参与氧化还原过程，清除内源性过氧化物和自由基，维护蛋白质活性中心的巯基处于还原状态。 （2）?? 短杆菌肽（抗生素）和缬氨霉素 短杆菌肽是由短杆菌产生的10肽环。抗革兰氏阳性细菌，临床用于治疗化脓性病症。 ? L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Val—L-Orn—L-Leu—D-Phe —L-Pro—L-Val (3)?? 脑啡肽（5肽） Met 脑啡肽： Tyr—Gly—Gly—Phe—Met 具有镇痛作用。 三、蛋白质一级结构 （一）蛋白质一级结构的定义及表示法 一级结构（又称化学结构或共价结构）： 是指蛋白质分子中氨基酸残基的排列顺序，包括二硫键的位置和数目。 （二）蛋白质测序的一般步骤 （1）??? 测定蛋白质分子中多肽链的数目 （2）??? 拆分蛋白质分子中的多肽链。 （3）?? ?断裂链内二硫键。 （4） 分析多肽链的N末端和C末端。 （5）??? 测定多肽链的氨基酸组成。 （6）??? 多肽链部分裂解成肽段。 （7）??? 测定各个肽段的氨基酸顺序 （8）??? 确定肽段在多肽链中的顺序。 （9）??? 确定多肽链中二硫键的位置。 （三） 测序前的准备工作 1、?? 蛋白质的纯度鉴定 纯度97%以上，均一。 ⑴聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)要求一条带 ⑵DNS-Cl（二甲氨基萘磺酰氯）法测N端氨基酸 2、测定分子量，估算氨基酸残基数，确定肽链数 SDS凝胶过滤法 沉降系数法 四、蛋白质的二级结构 （二）?? 肽单位（肽单元）与二面角 两面角（dihedral angle） 在多肽链里，Cα碳原子刚好位于互相连接的两个肽平面的交线上。Cα碳原子上的Cα-N和Cα-C都是单键，可以绕键轴旋转，其中以Cα-N旋转的角度称为ф，而以Cα-C旋转的角度称为ψ，这就是α-碳原子上的一对二面角。 ②相邻的螺圈之间形成链内氢键。氢键的方向与α螺旋的方向几乎平行。 ③ 与a-碳原子相连的R侧链，位于a螺旋的外侧，对α螺旋的形成和稳定有较大的影响。 R侧链对α-螺旋的影响 ① 多肽链上连续出现带同种电荷基团的氨基酸残基,(如Lys，或Asp，或Glu)，不能形成稳定的α—螺旋。如多聚Lys、多聚Glu。 ② Gly在肽中连续存在时，不易形成α—螺旋。 ③ R基大（如Ile）不易形成α—螺旋。 ④ Pro（脯氨酸）中止α—螺旋。 ⑤ R基较小，且不带电荷的氨基酸利于α—螺旋的形成。如多聚丙氨酸在pH7的水溶液中自发卷曲成α—螺旋。 2、?? β-折叠(β-pleated sheet) 两条或多条几乎完全伸展的多肽链（或同一肽链的不 同肽段）侧向聚集在一起，相邻肽链主链上的NH和 C=0之间形成氢链，这样的多肽构象就是β-折叠片。 每一个多肽链称为一个β-折叠股。 3、 β-转角（β-turn） 也称β-回折（reverse turn）、β-弯曲（β-bend） 球状蛋白质分子中出现的180°回折，由第一个a.a残 基的C=O与第四个氨基酸残基的N-H间形成氢键。 β －转角的特征： ①由多肽链上4个连续的氨基酸残基组成。 ②主链骨架以180°返回折叠。 ③第一个a.a残基的C=O与第四个a.a残基的N-H生成氢键 ④C1α与C4α之间距离小于0.7nm ⑤多数由亲水氨基酸残基组成。 4、?? 无规卷曲 没有规律的多肽链主链骨架构象。 往往与生物活性有关 五、? 超二级结构和结构域 1、超二级结构定义： 在蛋白质分子中，由若干个相邻的二级结构单元（α-螺旋、β-折叠、β-转