电镜生物医学样品制作方法与电镜观察应用.ppt

电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 超薄切片制作程序 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 常规超薄切片电镜观察 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 常规超薄切片电镜观察 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 常规超薄切片电镜观察 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 电镜酶细胞化学 细胞器的标志性酶 溶酶体-----酸性磷酸酶 线粒体-----琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶 内质网-----葡萄糖-6-鳞酸酶 高尔基体----硫氨素焦磷酸酶等 微体-----过氧化氢酶 细胞膜-----ATP酶、碱性磷酸酶等 ……. 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 电镜酶细胞化学 固定剂： 1%戊二醛+4%多聚甲醛 （二甲胂酸钠缓冲液） 孵育液（ATP酶）： 50mM Tris缓冲液 ATP（钠盐）2mM MgSO4 5mM 硝酸铅3.6mM 对照反应液： -ATP 电镜超薄切片程序 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 电镜免疫细胞化学 细胞表面抗原胶体金标记 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 电镜免疫细胞化学 真菌表面抗原胶体金双标记（5nm和16nm） 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 电镜放射自显影 放射性同位素标记—固定、脱水、包埋、超薄切片、覆盖核乳胶膜、曝光、显影、定影、染色、观察 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 示踪细胞化学 硝酸镧示踪 小肠粘膜表面 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 冷冻蚀刻技术（复型） 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 负染色技术 利用染色剂高密度的背景，“包埋”低密度的样品。 染色剂：醋酸铀、磷钨酸 用途：生物大分子、病毒、细菌、 分离的细胞器、 蛋白质晶体等颗粒性物质 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 负染色技术 轮状病毒 西汉古尸胶原纤维 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 液体材料的制作 碳支持膜铜网 将液体滴在覆有支持膜和碳膜的铜网上静置数分钟，待其干燥后即可电镜下观察。 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 粉末材料的制作 ①将粉末直接涂在覆有支持膜和碳膜的铜网上。 ②如果样品分散不好，可用适当的溶剂稀释，再用超声波 分散后按液体材料的方法制作。 ③观察纳米颗粒内部结构的材料， 可将样品包埋在环氧树脂中， 经超薄切片后电镜下观察。 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 扫描电镜技术（生物材料） 冷冻断裂 ↑ 取材 → 固定（前、后）→ 浸洗 → 脱水 → 置换 ↓ ↓ 清洁表面 （真空、空气、冷冻、临界点） 干燥 ↓ SEM 喷金 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 扫描电镜技术（生物材料） 取材： 1、表面清洁 2、迅速固定 3、注意大小 干燥： （1）空气干燥 （2）真空干燥 （3）冷冻干燥 （4）临界点干燥 喷金：铂金 电镜生物医学样品制作方法和电镜观察应用 扫描电镜技术（生物材料） 取材 冷冻断裂 清洁表面 固定