苯酚硫酸法测多糖含量.pdf

一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制 1. 浓硫酸：分析纯， 95.5% 2. 5% 苯酚：取苯酚 5 g ，置 100 ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕 色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。 3. 标准葡聚糖（ Dextran, 瑞典 Pharmacia ）或分析纯葡萄糖。准确称取 20m g 经 105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于 500ml 容量瓶中，蒸馏水溶解定容。 2、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖） 10mg于250ml 容量瓶中，加水至刻度，分 别吸取 0.2 、0.3 、0.4 、0.5 、0.6 、0.7 、0.8 及0.9ml ，各以蒸馏水补至 1.0ml ， 然后加入 5%苯酚 1ml 及浓硫酸 5.0ml, 摇匀冷却，室温放置 20min 以后于490nm测 光密度，以 1.0ml 水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光 密度值，得标准曲线。 1 2 3 4 5 6 7 8 0 标 准 葡 萄 糖 溶 液 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 （mL） 蒸馏水（ mL） 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 5%苯酚（ mL） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（ mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 供参考 y = 54.353x + 0.0018 值 2 光 R = 0.9994 0.3 吸 0.2 0.1 0 葡萄糖浓度（ mg/ml） 0 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 葡萄糖标准曲线 3 注意事项 （1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线， 颜色持久。 （2 ）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数 0.9 校 正 μg 数。 （3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲 线的校正系数加以校正计算 （4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在 0.1 —— 0.3 之 间。比如：小于 0.1 之下可以考虑取样品时取 2克，仍取 0.2ml 样品液，如大 于 0.3 可以减半取 0.1ml 的样品液测定。 （5）正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。注意硫酸的纯度。空白的颜 色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌 （苯酚氧化生成）的颜色颜色 过深的话说明你的酚的难度过大， 一般是 5%但是没遇到你说的那么严重， 不是深 红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。 操作的时候有几条