皮肤储存新技术研究与临床应用.ppt

皮肤储存新技术研究和临床应用;前 言 ;皮库的意义;我院皮库简介：;我院皮库简介：;我院皮库简介：;第一部分 皮肤的低温储存; 皮肤储存的基础知识; 皮肤的结构 ;皮肤的结构;皮肤的主要功能：;水分 电解质;大面积烧伤病人创面焦痂的存在引起： ;皮肤储存的必要性：;皮片的来源及种类;皮肤的低温储存; 　理论上，储存温度越低，储存物活力保持的时间越长，细胞组织代谢越低，污染的细菌也不易繁殖;　表１　　皮肤储存方法比较; 　　低温保存关键在于解决低温损伤对生物组织的影响。经典的低温生物学认为在低温条件下，细胞主要受到来自两种因素的损伤即溶质性损伤和胞内冰损伤，即“两因素”学说 ;“两因素”学说;“两因素”学说; 皮肤不是单细胞成分，而是由表皮和真皮构成的复合组织，由于皮肤内的各种主要细胞成分的结构与功能的复杂性，各种细胞代谢与营养条件不同,对环境改变的适应性亦有所不同。因此皮肤的低温损伤是一个更为非常复杂的过程; 近年来的研究发现，表皮细胞低温损伤还与细胞骨架、细胞连接桥粒以及细胞间黏附的关系密切 ;低温损伤的干预：;玻璃化的基础知识; 玻璃化的概念 玻璃化是一个物理学的概念，是指当水或溶液在极快降温到或低于-100～-110℃的温度范围时，形成一种具有高黏度的界于液态和固态之间、非晶体态的、杂乱无章的、透明的玻璃状态; 玻璃化储存生物组织和细胞，由于降温速率很快，水分没有足够的时间来形成冰晶，即进入均匀的玻璃状态。这种玻璃态的物理性能与晶体态不同，是一种既可以避免或减轻冷冻过程组织的损伤，又是同时可长期保存组织的良好方法;两种方法的比较; 　皮肤在－196℃的深低温环境中，其组织和细胞内各种酶的活力及代谢很低甚至近乎零，即所谓的“生命悬持状态 ”。在此温度下保存的皮肤理论上可无限期储存;　　　理论上说，体积很小的1微升纯水要用106-107℃/s降温速率才能形成玻璃态 　;　　以水为主要成分的生物组织,实现完全玻璃化需要极高的降温速率。目前只能采用各种方法实现部分玻璃化，抑制冰晶形成和长大，避免细胞严重损伤 ;皮肤玻璃化???存的途径;皮肤玻璃化储存的途径;皮肤玻璃化储存的途径;抗 冻 剂 的 应 用;抗冻液的作用及机制：;目前较为成熟抗冻液配方;;总结：玻璃化储存皮肤的步骤;玻璃化对皮肤结构和功能的影响;玻璃化对皮肤抗原性影响;低温对朗格汉斯细胞的影响;异体皮匀浆免疫扩散电泳图;异体皮匀浆免疫火箭电泳图;皮肤活力的鉴定;常用的皮肤活力的鉴定方法;皮肤氧耗量测定法;我院自行设计的测氧仪外观;琥珀酸脱氢酶测定法;琥珀酸脱氢酶测定法示意图 ;四氮唑盐WST-1法;四氮唑盐WST-1法;SYTO/EB双重染色法;玻璃化对皮肤活力的影响 ;速冻玻璃化储皮的优点及效果：;第二部分临床实际应用;冷冻异体皮的适用范围;异体皮覆盖创面的意义;应用方法;大张异体皮+微粒皮制备方法;大张异体皮+微粒皮制备方法;大张异体皮+微粒皮制备方法;;切 削 痂 后 创 面;大张异体皮覆盖创面 ;微粒皮植皮注意事项;临床变化;临床病例;临 床 病 例;临 床 病 例;皮肤低温储存的基础研究进展;细胞微环境略图;黏附连接;海藻糖分子结构示意图;FN免疫组化染色结果 ;;LN免疫组化染色结果 ;新鲜皮肤LN免疫组化染色 × 360;表2 低温储存对皮肤表皮FN和LN含量的影响 （平均积分光密度， X±SD，n=10）;E-cadherin免疫组化染色结果 ;新鲜皮肤E-cadherin免疫组化染色 × 360;β-catenin免疫组化染色结果 ;新鲜皮肤β-catenin免疫组化染色 × 360; ; 新鲜皮肤表皮层细胞结构清晰，排列正常，胞核圆形或椭圆形，－196℃皮肤结构基本正常，有少量胞质水肿，淡染，胞核缩小。 (HE×400) ; 新鲜皮肤组织β-actin主要分布于细胞质，颜色均匀分布,阳性反应强，－196℃组阳性反应减弱，但结构清晰，胞质染色基本呈红色 。(SP×200) ; ; 新鲜皮肤颜色均匀，阳性反应强，T/D组近似，但有少量细胞质水肿，胞核缩小。D/P组呈淡黄色，DMEM组呈阴性反应。 （SP×200，光镜） ; ;皮肤β1整合素及相关蛋白 免疫组化染色结果 ;基质蛋白-整合素-踝蛋白-骨架蛋白关系模型;整合素是一类位于细胞表面黏附分子，属跨膜糖蛋白 胞外区与基质蛋白相连，胞内区与细胞骨架相连，介导细胞内外双向信息传递 β1整合素位于皮肤基底细胞表面，维系表皮、真皮之间的连接，对维持细胞膜完整性及功能起着重要的作用 ;新鲜组; ; ; ; ;低温储存对皮肤组织基底膜影响; ; ;桥粒;桥粒芯糖蛋白1、2 免疫组化染色结果 ;锚着在桥粒斑上的细胞骨架细丝;