我的 过硅胶柱的经验.doc

一、装柱?装柱子(添硅胶)时,常用得有两种方法:即湿法装柱与干法装柱,二者各有优劣。??不论干法还就是湿法,硅胶(称为固定相更为广义)得上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)得高度一般为15cm左右(长度没有绝对之说,根据自身情况而定,制备得大柱可以长达一米),太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。　??湿法装柱就是先把硅胶用适当得溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压(土方法可以用养鱼得氧气泵加压或就是用氮气,当然不加压也可以)用淋洗剂走柱子＂,本法最大得优点就是一般柱子装得比较结实,没有气泡。 (我一般都用湿法装柱)?干法装柱则就是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧(湿法也要敲得,效果好点),至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装得很结实(一般柱子不敢用油泵抽,怕把柱子抽裂了)。接着就是用淋洗剂＂走柱子,一般淋洗剂就是采用TLC分析得到得展开剂得比例再稀释一倍后得溶剂。通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。干法装柱较方便,但最大得缺陷在于＂走柱子＂时,由于溶剂与硅胶之间得吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到)(梯度洗脱时,湿法装柱也会出现该情况,比较不好处理,可以缓慢改变溶剂,且置于通风处),容易产生气泡,这一点在使用低沸点得淋洗剂时如乙醚(用乙醚最最明显),二氯甲烷更为明显。虽然产生得气泡在加压得情况下不易察觉,但就是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作得时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。?解决得办法就是:?第一、硅胶一定要压结实;第二、　一定要用较多得溶剂”走柱子”,一定要到柱子得下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。??也有介绍在硅胶得最上层填上一小层石英砂(我一般垫张滤纸,撒上石英砂,再放些棉花),防止添加溶剂得时候,使得样品层不再整齐。但我得感觉就是如果小心上样,添加溶剂,则没有这个必要。?二、上样??上样也有干法与湿法之分:干法(也称硅胶制沙)就就是把待分离得样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到得粉末再小心加到柱子得顶层。干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整、(我一般喜欢用这种方法,除非不能用)??湿法上样就就是用少量溶剂(最好就就是展开剂,如果展开剂得溶解度不好,则可以用一极性较大得溶剂,但必须少量)将样品溶解后,再用胶头滴管转移得到得溶液,沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后,再加入。??湿法较方便,但不溶剂让其完全被硅胶均匀吸附,不容易跑得很平整?柱层析关键在于柱子就是否装好(这就是最大影响因素)与淋洗剂就是否选择恰当、而淋洗剂得选择则就是通过TLC确定。这里要指出得一点就是:TLC(作用还就是很大得)得作用除了跟踪反应进程,检测试剂与原料纯度外,一个重要得用途就就是为柱层析选择适当得淋洗剂。上样完毕后,接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用ＴＬＣ分析得到得展开剂得比例再稀释一倍后得溶剂。由于层析柱与薄板得不同,即使两者使?用得硅胶都相同,但就是在把TLＣ分析得到得展开剂用在柱层析时,也显得极性偏大,所以要稀释一倍,但又不能稀释太多,否则成了靠扩散作用来分离,效果也不会好、(这一点很实用,不过有些特殊情况也不一定,如果要保险可以先做根小柱子跑一下,这样最安全,就就是花点时间)???三、收集??主要依靠ＴLC(据说国外有石英柱,直接用荧光灯照能瞧出来,不过太贵了,在国内不一定适用),需要切记得就是: ?第一、某种样品在这种展开剂中只显示一个点,并不等于在别得展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时,多尝试几种比例不同,成分不同得展开剂、展开剂得极性太小,点分不开,极性太大,也分不开、一般以目标产物得Rf值在0、3左右为最佳、第二、点不能点得太浓(在最后时应该点得浓点,这样瞧瞧有无收尽产品),否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近得话,一浓就变成一个点了、 ?第三、板上点得展开得清晰程度与溶剂得极性与物质在该溶剂中得溶解性有关,只有两者比较合适才能有一个交好得分离效果。　??选择适当得展开剂就是首要任务、一般常用溶剂按照极性从小到大得顺序排列大概为:石油迷〈己烷苯＜乙醚 展开剂得比例要靠尝试。?一般根据文献(这就是首选)中报道得该类化合物用什么样得展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好得展开剂。?很多时候,展开剂得选择要靠自己不断变换展开剂得组成来达到最佳效果、不行可以尝试两两混合,三者混合,一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性得体积比为1/3得混合溶剂,如果有分开得迹象,再调整比例,达到最佳效果,如果没有分开得迹象,最好就是换溶剂。　?在利用ＴＬC跟踪