临床色谱质谱检验技术：第二章 色谱分析概论.pptVIP

Thanks 通过学生熟悉的血液标本，成本组成，引导学生思考，要准确检测激素、氨基酸、维生素等物质，可以有哪些方法？此处设计学生互动 * 互动后，引出课程答案：第一准确识别。与学生一起回顾第一章质谱的概念：质谱（Mass Spectrometry）：是通过形成气相离子来研究物质的一种方法，根据质量、电荷、结构和（或）理化性质的差异，运用质谱仪对离子进行表征；质谱是一类特殊的天平，分类称量离子的质量。实际上，质谱就是从分子水平上准确识别化合物。 准确识别需要前提，比如：在课堂很容易识别出我，是因为设定条件的筛选后的识别；这个筛选也就是“分离”归类。 * 第二、是将目标化合物和杂质干扰完全分开。什么样的技术能达到将目标物与杂质完全分离的效果呢？色谱分析 * 此处引出完全分离+准确识别能快速、高效并且更准确的完成准确检测；这也就是色谱质谱技术的魅力所在。 * 色谱分析技术广泛应用于石油化工、化学化工、食品科学、法庭科学、环境科学、材料科学、生命科学、医药科学等领域，色谱技术在化学化工、石油化工、食品科学等领域的应用已经比较成熟，在医学检验领域也有越来越多的应用。可能有同学会后疑问，为什么色谱分析技术在医学检验领域还没有特别普及呢？这还要从色谱的发展历史说起。过渡到色谱发展简史介绍 * 1906年俄国植物学家米茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散为数条平行的色带。 * 1938年后，色谱法才迅速被各国的科学工作者所注意和应用，促使色谱分析技术不断发展 * 1941年，马丁和辛格提出用气体代替液体作为流动相的可能性，11年之后，1952年詹姆斯（A.T. James）和马丁发表了从理论到实践的比较完整的气-液色谱法（Gas-Liquid Chromatography），为此获得了1952年的诺贝尔化学奖。 * 1967年，美国科学家荷瓦斯（C. Horvath）提出高效液相色谱法（HPLC）。高效液相色谱法与经典的液相色谱法相比，具有效率高、时间短和灵敏度高等优点。现已广泛应用于核酸、肽类、药物、人体代谢产物等的检测。 * * * * 还有另外两个柱效参数：塔板数（n）和塔板高度（H），在下节课讲解，大家可以先记住衡量柱效的参数总共有5个。 * 引言—色谱分析的主要应用 医药科学 食品科学 法庭科学 生命科学 材料科学 环境科学 石油化工 化学化工 色谱法起源于20世纪初，1906年俄国植物学家米茨维特做了如图的实验。 色谱发展简史 植物色素分离为不同的色带——色谱法(Chromatograph) 茨维特的整个实验是在一根管中完成的，又称为柱色谱 色谱发展简史—叶绿素分离 1931年奥地利科学家库恩等重复了茨维特的某些实验，用氧化铝和碳酸钙分离了 α β γ—胡萝卜素。库恩因此于1938年获得了诺贝尔化学奖； 后来陆续发展出了，纸色谱、薄层色谱、气相色谱、液相色谱。 色谱发展简史 薄层色谱和纸色谱（Paper Chromatograph ） 薄层色谱（Thin Layer Chromatograph，TLC）操作步骤： 给出起始线 点样 浸入展开剂（流动相） 喷洒显色剂 晾干 刮出目标物斑点 定性、定量分析 气相色谱（Gas Chromatography，GC） 1952年詹姆斯（James）和马丁发表了从理论到实践的比较完整的气-液色谱法，为此获得了1952年的诺贝尔化学奖。 液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 1967年，美国科学家荷瓦斯（Horvath）提出高效液相色谱法 常用色谱术语 《临床色谱质谱检验技术》 色谱流出曲线和色谱峰 色谱参数 相平衡参数 定性参数 定量参数 柱效参数 分离参数 常见色谱术语 色谱流出曲线和色谱峰 色谱参数 相平衡参数 定性参数 定量参数 柱效参数 分离参数 常见色谱术语 色谱流出曲线是检测信号随时间的变化曲线。由于信号强度正比于组分浓度或质量，所以其实际上是组分浓度随时间的变化曲线。 一、色谱流出曲线（色谱图 Chromagtogram） 色谱流出曲线(色谱图) 二、色谱峰(Peak)和基线（ Base Line） 基线：色谱流出曲线上，没有组分流经时的曲线 色谱峰：色谱流出曲线上突起的部分，即组分流经检测器产生的信号 色谱峰 基线 三、对称因子 A 正常峰 B 拖尾峰 C前延峰 噪声（RN） 未知的偶然因素引起的基线起伏现象 漂移（d） 基线随时间朝某一方向的缓慢变化，可以用单位时间基线水平的变化来衡量，漂移主要是实验条件不稳定引起的。 噪声（RN） 漂移（d） 四、噪音（Noise）和漂移 （Drift） 色谱流出曲线