细胞 培养综述.doc

细胞培养综述 摘要:为了模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖与传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题得研究。培养出得活细胞具有量大、均一与可重复性得特点,可以通过各种物理、化学、生物等因素进行调控,并且可以通过倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等多样得方法进行研究,已广泛运用在不同科学研究领域。 关键词:分化,细胞分型,生长增殖过程,传代 一、体内、外细胞得差异与分化? １、差异:细胞离体后,失去了神经体液得调节与细胞间得相互影响,生活在缺乏动态平衡得相对稳定环境中,日久天长,易发生如下变化:分化现象减弱;形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡;或发生转化获得不死性,变成可无限生长得连续细胞系或恶性细胞系［１]。因此,培养中得细胞可视为一种在特定得条件下得细胞群体,它们既保持着与体内细胞相同得基本结构与功能,也有一些不同于体内细胞得性状、实际上从细胞一旦被置于体外培养后,这种差异就开始发生了。?　 虽然体外细胞与机体细胞存有差异,但并未失去研究得意义、且不论其有许多性状仍与体内相同(如体外培养得心肌细胞仍可博动),只从细胞遗传学(Cyto-geneticｓ)得角度瞧,离体细胞仍带有全套得二倍体基因。细胞在培养中得表现,只不过就是相应基因关闭／开启引起得现象,这并非就是绝对缺陷。恰恰相反,在培养得细胞中某些特定功能得丧失,可为该基因得表达与调控提供线索、?? 2、分化;体外培养得细胞分化能力并未完全丧失,只就是环境得政变,细胞分化得表现与在体内不同、细胞就是否表现分化关键在于就是否存在使细胞分化得条件,如Friend细胞(小鼠红白血病细胞)在一定得因素作用下可以合成血红蛋白,血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构,杂交瘤细胞能产生特异得单克隆抗体,这些均属于细胞分化行为[２]。　二、体外培养细胞得分型?　 　(一)贴附型:大多数培养细胞贴附生长,属于贴壁依赖性细胞,判断细胞形态时不能接体内组织学标推判定,仅大致分成以下四型: 1、成纤维细胞型:胞体呈梭型或不规则三角形,中央有卵圆形核,胞质突起,生长时呈放射状、除真正得成纤维细胞外,凡由中胚层间充质起源得组织,如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态、另外,凡培养中细胞得形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。? ?2、上皮型细胞:细胞呈扁平不规则多角形,中央有圆形核,细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动,处于膜边缘得细胞总与膜相连,很少单独行动。起源于内、外胚层得细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态[3］。? 　 ?３、游走细胞型:呈散在生长,一般不连成片,胞质常突起,呈活跃游走或变形运动,方向不规则、此型细胞不稳定,有时难以与其她细胞相区别。? 　4、多型细胞型:有一些细胞,如神经细胞难以确定其规律与稳定得形态,可统归于此类、? (二)悬浮型;见于少数特殊得细胞,如某些类型得癌细胞及白血病细胞。胞体圆形,不贴于支持物上,呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。? 三、培养细胞得生长与增殖过程? (一)在细胞全生存过程中,大致都经历以下三个阶段: １.原代培养(Pｒiｍary Ｃｕltｕre)期:也称初代培养,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1一4周。此期细胞呈活跃得移动,可见细胞分裂,但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构与功能活动上相似性大。初代培养细胞多呈二倍体核型;由于原代培养细胞与体内细胞性状相似性大,就是检测药物很好得实验对象。 　 　２、传代期:初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系(Ｃell　Lｉｎｅ)、在全生命期中此期得持续时间最长、在培养条件较好情况下,细胞增殖旺盛,并能维持二倍体核型,呈二倍体核型得细胞称二倍体细胞系(Diplｏid Celｌ Ｌinｅ)、为保持二倍体细胞性质,细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。如不冻存,则需反复传代以维持细胞得适宜密度,以利于生存、但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10～50次左右,细胞增殖逐渐缓慢,以至完全停止,细胞进入第三期。? 　　 ３。衰退期:此期细胞仍然生存,但增殖很慢或不增殖;细胞形态轮廓增强,最后衰退凋亡、在细胞生命期阶段,少数情况下,在以上三期任何一点(多发生在传代末或衰退期),由于某种因素得影响,细胞可能发生自发转化(Ｓpoｎtaneous Ｔransformatｉon)。转化得标志之一就是细胞可能获得永生性(Immortality)或恶性性(Ｍaliｇnanｃy)。细胞永生性也称不死性,即细胞获持久性增殖能力,这样得细胞群体称无限细胞系(I