免疫学检验 沉淀反应 16 第十五章 免疫比浊分析.ppt

自动化免疫比浊分析 一、主流免疫比浊设备概况 一、主流免疫比浊设备概况 （一）BN特种蛋白分析测定系统 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种改良。以发光二极管作为光源，检测前向角13度～24度的散射光，然后利用硅化光电二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓度。 1 一、主流免疫比浊设备概况 系统由分析仪、计算机、条码读取器、打印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分，包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和比色杯装置。 1 一、主流免疫比浊设备概况 BN100、BNⅡ特种蛋白分析分析系统 一、主流免疫比浊设备概况 （二）IMMAGE分析系统 1 （二）IMMAGE分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散射光速率变化大小与抗原浓度成正比。速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。 （二）IMMAGE分析系统 2.仪器基本组成 ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试剂转盘、软盘驱动器等组成。 2.仪器基本组成 Array360、IMMAGE特种蛋白分析分析系统 自动化免疫比浊分析 二、免疫比浊分析的主要影响因素 二、免疫比浊分析的主要影响因素 抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 1 二、免疫比浊分析的主要影响因素 抗体的质量 诊断试剂应尽可能选择高纯度与高效价的抗体。 2 二、免疫比浊分析的主要影响因素 免疫复合物的大小及稳定性 溶液中免疫复合物颗粒的分散度尽可能相同，颗粒应该不容易相互聚集。 3 二、免疫比浊分析的主要影响因素 增浊剂 利用增聚剂破坏抗原抗体的水化层，促进反应的进行。 4 二、免疫比浊分析的主要影响因素 入射光光源和波长 多用氦氖光源。 5 二、免疫比浊分析的主要影响因素 标准曲线与质量控制 6 小结 Sum up 经典的免疫沉淀反应通常是在抗原抗体反应的终点进行结果判断，存在操作繁琐、费时、敏感度低及难以自动化等缺陷。自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。 感谢观看！ Thank！ 第十五章 免疫比浊分析 本章要点 免疫比浊分析的原理、方法、种类。 1 透射免疫比浊法的基本原理和临床应用。 2 散射免疫比浊法的分类与应用。 3 免疫胶乳比浊法的基本原理与临床应用。 4 影响免疫比浊分析的因素。 5 自动化免疫比浊分析法的发展趋势和应用前景 6 CONTENTS 目 录 01 02 免疫比浊技术原理 自动化免疫比浊分析 免疫比浊技术 原理 01 免疫比浊技术原理 免疫比浊技术分类： 透射免疫比浊法 (turbidimetric immunoassay） 散射免疫比浊法 (nephelometry immunoassay） 终点散射比浊法 速率散射比浊法 免疫比浊技术原理 透射比浊法和散射比浊法的光路图 免疫比浊技术原理 一、透射免疫比浊法 一、透射免疫比浊法 （一）基本原理 当一定波长的光通过抗原抗体反应形成的免疫复合物时会因为反射和吸收而减弱，一定范围内，透射光被吸收的量与复合物的量呈正相关关系，而复合物的量与抗原抗体量为一定的函数关系。 1 一、透射免疫比浊法 在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗原的量，这种方法称为透射免疫比浊法 。 1 一、透射免疫比浊法 （二）关键技术 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。 抗原抗体复合物数量足够多。 具有充分的反应时间。 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。 2 一、透射免疫比浊法 （三）方法学评价 透射免疫比浊法的灵敏度是单向琼脂扩散方法的5～10倍，但与其他标记免疫分析技术相比还不够高。因此，透射比浊类的自动分析仪用于免疫测定已趋减少，该测定原理主要用于生化分析仪。 3 免疫比浊技术原理 二、散射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 （一）基本原理 散射免疫比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到其中的抗原抗体复合物，光线被粒子颗粒折射而发生偏转，产生散射光。 1 二、散射免疫比浊法 其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。 1 二、散射免疫比浊法 （二）影响因素 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角度及光源的波长。另外，要注意保证抗原浓度合适。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。 2 二、散射免疫比浊法 终点散射免疫比浊法 终点散射免疫比浊法 也称为定时散射免疫比浊法（fixed time nephelometry）。 选择在抗原抗体反应的最佳时段