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实验七 生化反应与血清学实验 一、生化反应 实验目的 掌握细菌生化反应的原理和临床意义。 熟悉鉴别细菌常用的生化试验原理、方法和结果判断。 生化实验原理 由于各种细菌含有的酶系统不同,对各种营养物质的分解能力和分解产物亦不同,据此可在培养基中加入底物和指示剂,通过颜色的变化来区别和鉴定细菌。 实验原理 细菌产生的酶 产物 底物 鉴定产物 实验材料 1.菌种: 大肠埃希菌、沙门氏菌 2.微量生化反应管: 葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、蛋白胨水(靛基质)、硫化氢。 3.试剂: 吲哚试剂 实验方法 用接种针分别将大肠埃希菌、沙门氏菌穿刺接种于各生化反应管内,37℃培养18~24h观察结果。 1.单糖发酵试验 (1)原理: (2)方法:利用接种针将大肠埃希菌、沙门氏菌分别穿刺接种于5种糖生化反应管内,37℃孵育18~24h后观察结果。 细菌产生的酶 酸 糖 (酸碱指示剂) 气体 (3)结果判断: 本次用的酸碱指示剂为溴甲酚紫(中性或碱性呈紫色,酸性条件下呈黄色)首先观察细菌是否生长,细菌生长后,培养基呈混浊.可能出现3种结果 1.单糖发酵试验 + - + 2.靛基质试验 (1)原理: (2)方法:利用接种针将菌种接种于靛生化反应管内,37℃孵育18~24h后加入靛基质试剂,最后观察结果。 细菌产生的 色氨酸酶 吲哚 (无色) 色氨酸 靛基质试剂 玫瑰吲哚 (红色) 2.靛基质试验 (3)结果判断:上层呈红色为阳性,不变色为阴性 阳性 3.硫化氢试验 (1)原理: (2)方法:利用接种针将大肠埃希菌或沙门氏菌穿刺接种于硫生化反应管内,37℃孵育18~24h后观察结果。 细菌产生的酶 硫化氢 含硫的氨基酸 硫化铁 黑褐色 或硫化铅 3.硫化氢试验 (3)结果判断:变黑色为阳性反应,不变色为阴性。 二、血清学鉴定 实验目的 掌握细菌血清学鉴定法 实验原理 根据抗原抗体反应高度特异性的特点,在疾病诊断中可用抗原、抗体任何一方作为已知条件来检测另一未知方。 实验材料 菌种 沙门菌 试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 其他 无菌载玻片 沙门菌的主要抗原组成 主要有O、H、Vi Ag O Ag:至少58种,以1、2、3等阿拉伯数字顺序排列。凡含相同抗原组分归为一个组,引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组 H Ag:分为第Ⅰ和第Ⅱ相两种,第Ⅰ相以a、b、c等小写字母表示,第Ⅱ相以1、2、3等阿拉伯数字表示 Vi Ag:抗原性弱,不稳定,可阻止O抗原与其相应的抗体起凝集反应. 沙门氏(11种)血清一览表 O2 O4 O7 O9 Ha Hb Hc Hd Hi Vi A-F群多价O A-F群多价O
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