生物制药与药品检验技术 走近凝胶层析法—如何“脱盐”和分离蛋白质 课件：凝胶层析法脱盐和分离蛋白质.pptx

;项目一 血清蛋白类药物的原料制备与分析检验;凝胶法层析和分离蛋白质;学习内容： （1）什么是凝胶层析法 （2）交联葡聚糖凝胶 （3）凝胶层析法的一般操作 学习重点： （1）凝胶层析原理 （2）葡聚糖凝胶型号的含义及不同型号的用途 （3）凝胶层析大致操作步骤;1. 什么是凝胶层析 (gel chromatography)？;生产用层析柱;凝胶层析法操作过程 （operating process）;分部收集器;真空冷冻干燥机;盐析后的凝胶层析脱盐洗脱曲线(elution curve);2. 交联葡聚糖凝胶 凝胶类型：交联葡聚糖凝胶（sephadex）、交联聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶 葡聚糖凝胶孔径：以吸水量（water absorption）大小表示，G-10~G-200（数字为凝胶得水值的10倍） ;G-25：每克凝胶膨胀时吸水2.5克（吸水少，凝胶网孔致密） 市售：G-10、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、G-200 G-75以上的胶为软胶；G-75以下的称为硬胶 G-10~25通常用于分离肽及脱盐 G-75~200用以分离蛋白质（如何选择凝胶型号？）;3. 凝胶层析法的一般操作 层析柱的选择：一般用玻璃管或有机玻璃管 凝胶的选择：分离蛋白质采用100-200号筛目的凝胶 凝胶的制备：加热法 装柱：用肉眼观察色谱床有没有气泡或纹路 上样：凝胶柱体积一般为样品溶液体积的4~10倍 洗脱：在酸性洗脱剂中碱性物质容易洗脱，在碱性洗脱剂中酸性物质容易洗脱 收集和检出：蛋白质、核酸类或多肽类样品，可采用紫外检测器进行检验 经常使用的凝胶：湿法保存，加入抑菌剂可放置一年 ;总结：凝胶法层析和分离蛋白质