经典8.细菌与病毒的微生物学检查法.ppt

细菌学 诊断 检测 病原菌成分 检测患者血清中特异性抗体 细菌 病原学检查法 形态学检查 分离培养,纯培养 生化试验 血清学鉴定 药物敏感试验 毒力实验 动物实验 抗原 核酸 必威体育精装版.课件 * 一、细菌学诊断 必威体育精装版.课件 * （一）形态学检查 光学显微镜检查法：细菌染色检查法 革兰染色法 抗酸染色法 负染法 暗视野检查：用于检查活菌、螺旋体及其动力 荧光显微镜 必威体育精装版.课件 * 脑脊液的直接涂片染色-肺炎链球菌 必威体育精装版.课件 * 链球菌 必威体育精装版.课件 * 淋病奈瑟球菌-脓液直接涂片 必威体育精装版.课件 * 结核分枝杆菌 必威体育精装版.课件 * 霍乱弧菌 必威体育精装版.课件 * 暗视野显微镜 钩端螺旋体 必威体育精装版.课件 * 肺炎双球菌 必威体育精装版.课件 * 病原菌的分离培养/直接涂片 大小 形态 颜色 表面性状 透明度 溶血性 Flame sterilize wire loop, metal forceps, etc before and after use in a hooded Bunsen burner 必威体育精装版.课件 * 细菌动力的检测 必威体育精装版.课件 * 化脓性球菌 葡萄球菌 链球菌 必威体育精装版.课件 * 肠道杆菌 大肠埃希菌 沙门氏菌 志贺菌 细菌形态无特异性可采用生化学检查法-鉴别细菌的重要方法 必威体育精装版.课件 * （二）生化试验 糖发酵试验 H2S试验 枸橼盐利用试验 必威体育精装版.课件 * 鉴定中最重要的生化反应※ 乳糖发酵试验 肠道非致病菌（埃希菌属） 发酵乳糖、产酸产气＋ 肠道致病菌（志贺菌属、 沙门菌属等）不发酵乳糖 — 必威体育精装版.课件 * （三）血清学鉴定 利用含已知的特异性抗体的免疫血清，检测未知的细菌抗原，对细菌进行种的鉴定 志贺菌属、沙门菌属 常用方法是玻片凝集试验 必威体育精装版.课件 * 测定抗生素或其他抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力 方法： 扩散法、稀释法 （四）药物敏感试验 必威体育精装版.课件 * MIC MBC 最低抑菌浓度，MIC 最低杀菌浓度，MBC 必威体育精装版.课件 * 全自动分析仪 全自动细菌鉴定仪 全自动生化分析仪 必威体育精装版.课件 * （五）检测毒力-动物实验 1. 常用动物 　 Mouse　Guinea Pig　 Rabbit Dog Monkey 必威体育精装版.课件 * 接种途径 皮内 皮下 腹膜内 静脉 颅内 椎管内 鼻内 灌胃 必威体育精装版.课件 * 毒力检测 半数致死量 LD50 半数感染量 ID50 必威体育精装版.课件 * 二、检测病原菌成分 抗原的检测 核酸的检测 必威体育精装版.课件 * （一）抗原的检测 利用已知的特异性Ab检测Ag的方法 常用的方法有 玻片凝集 协同凝集试验 ELISA 免疫荧光法 必威体育精装版.课件 * ELISA 必威体育精装版.课件 * （二）核酸检测方法 聚合酶链反应（PCR） 核酸杂交技术 Southern blot Northern blot Dot blot In situ hybridization 基因芯片(Gene chip) 16S rRNA 必威体育精装版.课件 * 16sRNA基因序列分析 只存在于原核细胞型微生物的染色体基因中 16sRNA，23sRNA, 5sRNA 可变区和保守区 保守区：所有的细菌所共有 可变区：属和种的特异性 必威体育精装版.课件 * PCR Gene Chip 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 三、抗体的检测 用已知细菌或其Ag检测相应的特异性Ab及其量的多少，作为某些病原菌感染的辅助诊断 急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高≥4倍有诊断价值 方法 玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、 冷凝集试验、ELISA 局限 难以早期诊断 必威体育精装版.课件 * 第二节 病毒感染的微生物学检查法 形态学 病毒的分离鉴定 在培养细胞中增殖的鉴定指标 病毒成分的检测 病毒抗体的检测 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 抗原检测是检查病原菌的常用的技术，可以直接利用临床标本和临床分离菌株进行。这些实验特异、简便、敏感。即使是采集样本细菌未分离成功，但是细菌的抗原仍能检测出来。常用的方法主要有协同凝集实验，玻片凝集实验，酶免疫技术和免疫荧光技术等。 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 病原体侵入机体后，其抗原性物质能刺激机体产生特异性抗体。存在于血液胡咯其他体液中的特异性抗体，随着病程的进展发生变化。用已知细菌或抗原检测病人体内是否产生相应的特异性抗体及其量的多少，病原菌感染的辅助诊断。通常称为血清学诊断（serological diagnosis).血清学结果作为诊断依据时，采集急性期和恢复期的双份血清，恢复期血清效价明显升高4倍以上时才有诊断意义。 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * 必威体育精装版.课件 * * 电子显微镜能观察病