CD34+ 细胞及分离方法PPT演示课件.ppt

CD34+ 细胞分离及其体外扩增;CD34+细胞;CD34+细胞在骨髓，脐带血以及外周血中都有存在。用常规方法一般难以有效分离。原因主要在于CD34+抗原表达的拷贝较低，抗CD34+的亲和力低，表达CD34+抗原的细胞存在于一个不均一的本底细胞群中，且数量极少。 ;分离CD34+细胞的方法;流式细胞分选(fluorescence activated cell sorting,FACS)可获得高纯度的CD34+细胞，但是由于得量较少，受无菌实验条件等方面的限制，所以应用较少。 细胞物理参数系统分离CD34+细胞得率较低，而且需要提供足够的细胞量。 ;目前常用于分???CD34+细胞的方法主要是免疫吸附法（ systems based on immunoadsorption)。 尤其是用免疫磁珠吸附分离（immune adsorption on ferromagnetic beads)的方法应用更为广泛。;CD34+细胞分离方法比较;免疫磁珠吸附分离CD34+细胞;实验材料： 1.脐带血，外周血及骨髓标本； 2.PBS缓冲溶液； 3.10%BSA； 4.10mmol/LEDTA； 5.淋巴细胞分离液； 6.MACS磁性分离仪； 7.MACS分离试剂盒； ;操作步骤;分离结果;体外培养脐血单个核细胞与CD34+富集细胞的比较;方法 1.Ficoll 密度梯度离心收集单个核细胞; 2.免疫磁珠分离纯化CD34+细胞. 3.MNC接种密度为5*105 cells/ml. CD34+细胞为2*104 cells/ml于24孔板，每周取样计数，集落检测和流式细胞分析. ;结果; MNC扩增到第28天，细胞总数开始呈下降趋势，而另一组则持续扩增8周。在前4周中，MNC的扩增倍数远低于CD34+富集细胞;;造血干/祖细胞总集落扩增分析;;;小结;讨论与总结;谢谢