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维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较 目前研究维生素C测定方法的有很多，如荧光法、2, 6-二氯靛酚滴定法、2, 4- 二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等 ，各种方法 对实际样品的测定均有满意的效果。 目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是 HPLC 法上升趋势尤为明显。 一、荧光法 1 ?原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺 (OPDA反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline ),其荧光强度与脱氢抗坏血 酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总 量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA反应，以此排除样品中荧光杂 质所产生的干扰。本方法的最小检出限为 0.022 g/ml。 2 ?适用范围 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 二、2，6-二氯靛酚滴定法(还原型 VC GB/T6195—1986) 1、 原理： 还原型抗坏血酸还原染料2, 6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红 色消失。还原型抗坏血酸还原 2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。 在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准 2，6-二氯靛酚的量与样品中 所含维生素C的量成正比。本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用 4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。 2、 优点 简便、快速、比较准确等，适用于许多不同类型样品的分析。 3、 缺点 2, 6—二氯靛酚法虽然简便，但是药品价格昂贵。而且不能直接测定样品中的脱 氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰。如果样品中含有 色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。 三、分光光度法 1、原理： 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸， pH5,脱氢抗 坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸。脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和 2, 4-二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎，脎在 500nm波长有最大吸收。根据样品溶 液吸光度，由工作曲线查出VC的浓度，即可求出VC的含量 四、2, 4-二硝基苯肼法 1、 原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性 炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2, 4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总 抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。 2、 适用范围 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。 3、 缺点： 易受色素影响，当待测液本身有颜色时，吸光值会受到影响，从而影响到测定结 果的准确性。且该法操作麻烦，试剂较多，耗时较长。 五、磷钼蓝分光光度法测定维生素 C 1、测定原理 染料2,6 -二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态 氧化态为深蓝色，还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深 蓝色,在酸性介质中呈浅红色。 用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴 定,染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅 红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。 2、优点 该方法简单、快速、准确，且回收率特别高 六、紫外快速测定法 原理： 维生素C的2, 6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物 质、样品色素颜色和测定时间的影响。 紫外快速测定法，是根据维生素C具有对 紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者 消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素 C的含量。 七、高效液相色谱法测定维生素 C （ HPLC法） 1、原理： 高效液相色谱法（High performanee Liquid Chromatography，HPLC是在经典液 相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。 它与 经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀， 小颗粒具有高柱效，但会引起高阻 力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法 (High Pressure Liquid Chromatography，HPLC。又因分析速度快而称为高速液相色谱法 (High Speed Liquid Chromatography ，HSLP)b 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由 于与固定相(stati on ary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和) 的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称 为色层法、层析法。 高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、 液液分配色谱法(正相 与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 2、优点： 高