柔红霉素治疗白血病_重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制.docVIP

柔红霉素治疗白血病_重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制 重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制 重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用 及其机制 为了研究重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ recombinanat mutant human TRAIL, rmhTRAIL）单用及与柔红霉素（DNR）联合应用对白血病 细胞株U937、K562的诱导凋亡作用及其机制，以正常人胚肺成纤维细胞株MRC-5 作对照，采用MTT法检测体外培养的U937、K562白血病细胞株在rmhTRAIL单用和 联合DNR作用下增殖的抑制效应；用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检 测DNR 处理前后白血病细胞TRAIL死亡受体和诱杀受体的mRNA表达水平。 结果表 明：rmhTRAIL对白血病细胞株U937、K562有较明显的抑制增殖作用，DNR与TRAIL 联合对抑制肿瘤细胞具有协同性，与各药单独使用比较均有显著差异（P0.05）。DNR对正常细胞和肿瘤细胞均有生长抑制作用，且表现为剂量依 赖性，q检验比较组间差异具有统计学意义（P0.05）。Table 1. Inhibition on K562，U937 and MRC-5 cell lines induced by rmhTRAIL or DNR alone(略) 联合用药rmhTRAIL联合DNR作用于3种细胞,对细胞生长抑制的影响见表2。在 K562、U937细胞中联合用药组的抑制率与单独使用rmhTRAIL或DNR组比较皆有显 著差别（P0.05），随着药物作用剂量的增加，两种药物对K562、U937细胞的联 合抑制作用呈增强趋势(P0.05)。用金（正均）氏公式分析显示：在不同浓度两 药联用后，K562细胞Q值介于单纯相加与增强乃至明显增强之间（0.98± 0.13-2.75±0.18）；U937细胞Q值介于单纯相加与增强之间（0.82±0.12-1.24 ±0.13）；而MRC-5细胞Q值介于拮抗与单纯相加之间（0.59±0.09-1.01±0.13） （表3）。由此可以看出，对于K562、U937 2种细胞，联合用药均比两者单独用 药效果好，而对于MRC-5联合用药无明显的协同效果。Table 2. Inhibitions on three cell lines induced by rmhTRAIL combined with DNR（略）Table 3. Synergistic effects of rmhTRAIL with DNR on K562，U937 and MRC-5 cell lines（略） RT-PCR检测 处理前3种细胞受体的表达水平检测K562、U937 及MRC-5 3种细胞4种受体 mRNA表达水平发现，3种细胞DR4和DR5 mRNA均有表达（图1、2），DR4在K562 表 达最高，而DR5在MRC-5 表达最高（表4）。DcR1 mRNA仅在MRC-5较高表达(1.23 ±0.01)，K562、U937细胞未见表达（图3）。DcR2mRNA在MRC-5较高表达(1.78 ±0.01)（图 4），在K562、U937细胞表达较低分别为（0.16±0.01、0.31±0.01) （P均?0.05）；且DcR2在K562、U937细胞之间表达无差异（P?0.05）。 处理后3种细胞受体的表达水平变化3种细胞分别与DNR（200 ng/ml）共同孵 育24小时后：K562、U937细胞的DR5 mRNA表达水平均有提高（P?0.05），K562的DR4 mRNA表达水平也有提高，两种肿瘤细胞的诱杀受体DcR2表达水平变化无影 响（表4）；正常细胞株MRC-5的4种受体表达均未受到DNR作用的影响。Table 4. Expression levels of four rmhTRAIL receptor mRNAs in K562,U937 and MRC-5 (略) DNR讨论 TRAIL是由Wiley等［2］于1995年新发现的肿瘤坏死因子超家族成员，它广 泛表达于多种正常组织和细胞［2，3］，通过与细胞膜上不同受体结合而发挥不 同作用。目前已发现了5种受体，分别是DR4、DR5、DcR1、DcR2及可溶性受体 （osteoprotegerin，OPG）［4］。其中DR4、DR5是死亡受体，TRAIL与之结合后 能诱导细胞凋亡；DcR1、DcR2及OPG是诱杀受体，由于其结构缺乏胞内信号段， 与TRAIL结合后细胞不能传递凋亡信号而逃避凋亡。因此，不同于其他肿瘤坏死 因子TNF 和Fas 配体 (Fa