细菌病毒培养技术.pptxVIP

细菌培养技术 ;①对氧气要求：专性需氧菌 微需氧菌 兼性厌氧菌 专性厌氧菌 ②对CO2要求： 5% CO2;（二）细菌生长繁殖的方式;（三）细菌生长繁殖的速度;（四）细菌生长繁殖的速度;（五）常用培养基种类;细菌培养技术 ;二、细菌的规模化培养;培养方法;4．透析培养法 在细菌培养液与培养基之间隔有一层透析膜，使培养基中高浓度小分子量的营养成分通过透析膜（不能透过大分子的细菌或毒素）不断扩散到细菌培养液中，供细菌生长繁殖，获得高浓度的细菌或毒素。 ;5、连续培养;细菌培养技术 ;三 细菌的计数技术;平板表面散布法 接种量为0.1ml 琼脂板的制备 稀释菌液 接种 培养 计数 选择菌落数在30～300之间的平皿用以计数，每个稀释度应取其菌落平均数。 活菌数／ml=2个平板平均菌落数×10×稀释倍数。 举例：在10 稀释的平板中所得平均菌落数为78个。 计算结果：78×10×10 =7.8×10 个活菌／ml 微量点板计数法 接种量为0.02ml; 3 比浊计数法 是对比细菌悬液与标准管的浊度，求出大致的菌数。 原理：菌液中含数多少与其浑浊度成正比。 方法：比浊管比浊法和分光光度计法。 优点：快速简便 应用：常用于菌苗及其他生物制剂的生产、细菌毒力的测定和攻毒量的确定等。;标准比浊法;分光光度计法;病毒培养技术 ;　　病毒复制：以病毒基因为模板，在酶的作用下，分别合成基因和蛋白质，再组装成完整的蛋白颗粒，这种方式称为复制（ replication) 。;吸附;病毒培养技术 ;1 病毒的动物培养技术;1.皮内接种 2.皮下接种 3.肌肉接种 4.静脉接种 5.腹腔接种; 动物接种后的饲养管理与收获病毒;病毒培养技术 ;2 病毒的禽胚培养技术;操作要点;3 禽胚的接种途径;4 禽胚的接种后孵育;5 病毒的收获 ;照 蛋;尿囊腔接种法;接种部位消毒;尿囊腔接种;;收获尿囊液—每枚鸡胚收获尿囊液6～8ml;;病毒培养技术 ;细胞培养技术（cell culture);3 病毒的细胞培养技术;培养常用的细胞;1.培养液：生长液、维持液，Eagle氏液、RPMI-1640、199、DMEM、MEM等营养液 。 2.细胞接种量:适宜。 3.pH：一般为7.0～7.4因???胞种类不同而略有差异。 4.温度：一般为37～38℃。 5.气体：氧气和二氧化碳。 6.无菌条件：培养的全过程都要求严格的无菌条件 。;各种组织是靠细胞间质黏合而成的，要获得分散的细胞，必须破坏细胞间质。分散细胞的方法的三种： 机械分散法：适用于细胞间连接较松的组织，如禽胚组织。 酶消化法：此法适用于原代细胞的制备及细胞的传代培养。 螯合剂分散法：一般只用于单层细胞的分散。 ; ;犊牛肝脏单层细胞;病毒培养技术;病毒增值指标与收获;检测病毒;;谢谢！;（四）细菌生长繁殖的速度;4．透析培养法 在细菌培养液与培养基之间隔有一层透析膜，使培养基中高浓度小分子量的营养成分通过透析膜（不能透过大分子的细菌或毒素）不断扩散到细菌培养液中，供细菌生长繁殖，获得高浓度的细菌或毒素。 ;4．透析培养法 在细菌培养液与培养基之间隔有一层透析膜，使培养基中高浓度小分子量的营养成分通过透析膜（不能透过大分子的细菌或毒素）不断扩散到细菌培养液中，供细菌生长繁殖，获得高浓度的细菌或毒素。 ;吸附;吸附;培养常用的细胞;病毒培养技术;谢谢！