植物组织培养技术 工作培养基的配制基灭菌 工作培养基的配制.ppt

工作培养基的配制及灭菌 培养基配制流程 移母液 调PH值 灭菌 称取琼脂 扎　口 定　容 分　装 二次定容 接种 确定配方 溶解琼脂 称取蔗糖 贴标签 一、工作培养基配制 大量元素母液（20X） 微量元素母液（200X） 铁 盐母液（200X） 有机物母液（200X） （一）母液的计算及移取 1、培养基配方：（以1L百合继代培养基为例） MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖+0.8%琼脂 6-BA(0.5mg/ml) NAA(0.1mg/ml) 取？ml 取？ml 取？ml 取？ml 取？ml 取？ml 母液移取量（ml)= 要求：一次性移取，不能吸进吸气球里，数量看准，不滴不漏，吹净为度。 配制培养基体积（ml) 母液浓缩倍数 激素母液移取量（ml)= 培养基要求的含量 激素母液浓度 （二）琼脂、蔗糖称量与溶解 根据配方称量琼脂7-8g 到约200-300ml水中 充分溶解琼脂 加入 加热 加入 根据配方称量蔗糖25-30g 移取的母液 加入 混合后定容 测定PH值 （三）分装 趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml 。 （四）扎口 要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。 （五）贴标签 注明日期及培养基类型。 二、培养基灭菌 培养基应及时灭菌，防止变质。 培养基灭菌一般采用高压湿热灭菌。 灭菌后，一般应将灭菌后的培养基储藏于30℃以下的室内名，最好储藏在4－10℃的条件下。 应当注意的是，某些生长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素是不稳定的，不能和其他的培养基一起高压灭菌，而要进行过滤灭菌。