食品生物化学 蛋白质的结构与性质 蛋白质第3节3.蛋白质的分离纯化与测定(3②细分级分离③活力测定）.pptx

? ? 蛋白质;一般蛋白质样品经粗制分级后，体积较小，杂质大部分被除去。进一步提纯，通常使用高分辨率的柱层析及电泳方法。 ;常用的柱层析方法有分子筛层析、离子交换层析、疏水吸附层析、亲和层析。另外，结晶也是蛋白质分离纯化的方法之一，制备的结晶物常常作为蛋白质结构分析之用。;1、离子交换层析法;带正电荷多的蛋白质与树脂结合较强，而带正电荷少的蛋白质与树脂结合则较弱。用不同浓度的阳离子洗脱液，如NaCl溶液进行梯度洗脱，通过Na+的离子交换作用，可以将带有???同正电荷的蛋白质进行分离。;2、疏水吸附层析;离子强度增大可增强吸附能力，因此常常在2mol/L或3mol/L NaCl溶解样品，洗脱时可通过降低盐浓度、增加乙二醇浓度进行梯度洗脱。;3、亲和层析法;将这种连接有配基的载体装入层析柱中，当含有待纯化的蛋白质溶液通过层析柱时，该蛋白质即与配基发生特异性结合而被吸附在层析柱上，而其它蛋白质则流出柱外。被特异性结合在层析柱上的蛋白质，可以用适当的配体洗脱液洗脱。;常用的配基有抗体、抗原、激素或受体蛋白、酶的底物和抑制剂等。层析柱载体为琼脂糖凝胶等。;4、分子筛层析;在酶的制备过程中，每一步骤都应测定留用以及准备弃去部分中所含酶的总活力和比活力，以了解经过某一步骤后酶的回收率、纯化倍数，从而决定这一步的取舍。 ;总活力=活力单位/ml酶液×总体积（ml）比活力=总活力单位数/总蛋白（氮）mg纯化倍数=每次比活力/第一次比活力回收率（产率）=（每次总活力/第一次总活力）×100%;本节课到此结束，谢谢大家