K212 食品快速检测技术、K211 农产品快速检测技术 W1203酶联免疫法检测猪肉中克伦特罗的原理、W1203酶联免疫法检测猪肉中克伦特罗的原理 KJ01 ELISA技术.pptx

;;免疫检测的基础知识;;一、免疫检测基础知识;;一、免疫检测基础知识;一、免疫检测基础知识;一、免疫检测基础知识;一、免疫检测基础知识;一、免疫检测基础知识;一、免疫检测基础知识;;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA);3. ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。 再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。;4. ELISA的试剂(A、B、C三部分);ELISA的试剂准备A ;　ELISA的试剂准备B ;试剂准备 C 酶的底物 ;5 对照设定 ;基本操作注意事项; 在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 ;保温;保温方式：ELISA仪器附有特制的电热块，水浴。 若用保温箱：ELISA板放在湿盒内，在盒底垫湿的纱布，最后将ELISA板放在湿纱布上。反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。 室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。;洗涤;显色;拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪中。 以蒸馏水校零点，测读底物孔（未经任何反应仅加底物液的孔）和空白孔（以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔），以记录本次试验的试剂状况。其后可用空白孔以蒸馏水校零点，以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度，然后进行计算。 结果以光密度（oplical density，OD），现按规定用吸光度（absorbence，A），两者含义相同。通常的表示方法是，将吸收波长写于A字母的右下角，如OPD的吸收波长为492nm，表示方法为A492nm或OD492nm。;严谨的设计，优质的试剂，正确的操作和良好的仪器是保证ELISA必要条件。 严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。;谢谢大家！;