中药成分测定方法[宣贯].pptVIP

第三节 常用定量分析方法 正相色谱:流动相极性小于固定相极性的分配色谱法，主要用于极性物质的分离测定； 反相色谱:流动相极性大于固定相极性的分配色谱法，主要用于非极性、中等极性物质的分离测定 * 精品PPT | 实用可编辑 第三节 常用定量分析方法 化学键合相是将固定液的官能团键合在载体上所形成的固定相。 具有化学性能稳定，热稳定性好，一般在pH2-8范围的溶液中不变质，使用过程不流失，载样量大，适于梯度洗脱等特点，已广泛用于正相与反相色谱，离子抑制色谱，离子对色谱。 药典中HPLC法所采用的固定相均为化学键合相。以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法. 现就中药分析中最常用的键合相色谱法作一介绍。 * 精品PPT | 实用可编辑 第三节 常用定量分析方法 （2）精密度考察 取同一供试品溶液，在同一块薄层板上以相同点样量平行点5点以上，展开后测定其峰面积，求算相对标准差（RSD），作为衡量定量分析结果精密度的指标。RSD应小于4%。  式中：为n次测量的平均值，S为标准差。 * 精品PPT | 实用可编辑 第三节 常用定量分析方法 （3）准确度考察 回收率是衡量定量方法准确度的指标，常用加样回收率（R）来衡量，其值应在95-105%之间，测量数据一般为5-6个。 将加入纯品的试样溶液、供试品溶液及标准溶液点于同一块薄层板上，展开后进行薄层扫描，测定各斑点的峰面积，计算各溶液中组分的量，计算回收率（R）。 * 精品PPT | 实用可编辑 （4）统计检验 统计检验是检验两种方法、两台仪器或两个人测量的两组实验数据的精密度或准确度（偶然误差或系统误差）间是否存在显著性差异，说明新建定量方法可否代替旧方法或优于旧方法。 统计检验包括F检验与t检验。 F检验即精密度差别检验，用以检验两组数据的精密度或偶然误差是否存在显著性差异，一般为单侧检验。 t检验即准确度差别检验，用以检验两组测量数据的平均值或系统误差是否存在显著性差异。若t检验证明两种方法测得的均值不存在显著性差异时，则新方法可以代替旧方法，t检验一般为双侧检验。 t检验与F检验的具体方法参见分析化学的有关论著，此从略。 第三节 常用定量分析方法 * 精品PPT | 实用可编辑 第三节 常用定量分析方法 2、定量方法 常用的定量方法有外标法、内标法、追加法（叠加法）及回归曲线定量法。 （1）外标法 外标法是薄层色谱扫描最常用的定量方法，方法简便，但点样必须准确。 ①外标一点法 工作曲线通过原点（截距为零）时可用外标一点法定量。只需点一种浓度的标准品溶液，与供试液同板展开，对比，测定组分含量，其计算公式为： C=F1·A 式中：C为组分的重量或浓度，A为测得该组分的峰面积，F1为直线的斜率或比例常数。 * 精品PPT | 实用可编辑 ②外标二点法 工作曲线不通过原点时，只能用外标二点法定量，至少需点二种不同浓度的标准溶液（或一种浓度两种点样量），才能决定一直线,其计算公式为： C=F1A+F2 式中：C、A同前，F1为直线的斜率或比例常数，F2为纵坐标的截距，F1和F2值由仪器自动算出。 外标一点法、二点法只是指用一种或二种浓度的标准溶液对比定量，为减小误差，同一薄板上供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得少于2个；并调整标淮溶液的浓度或供试品与标准溶液的点样量，使其峰面积相接近；且点样量必须准确，宜用定量毛细管点样。 第三节 常用定量分析方法 * 精品PPT | 实用可编辑 第三节 常用定量分析方法 （2）内标法 内标法是选一个纯物质作为内标物，并准确称取一定量内标物加至供试液及标准液中，计算供试品溶液中某组分含量的定量方法。 内标物的选择要求是： 纯度合乎要求，展开后不得有杂质斑点，否则内标斑点的峰面积将不能代表内标物的量。 内标物须为样品中所不含有的成分。 内标物不与其它斑点相重叠，分离度合乎要求。 为简化计算，内标物在标准溶液及供试品溶液中的浓度应相等。 * 精品PPT | 实用可编辑 特点： 1）在一定点样量范围内，内标法定量准确度与点样量无关。 2）不易找到适宜Rf值的纯品内标物，且溶液配制等操作较麻烦。 方法： 1）内标一点法：当工作曲线通过原点时采用内标一点法。 内标一点法公式： 2）工作曲线不通过原点时必须采用内标二点法 内标二点法公式： 式中：C、Cis分别为组分及内标物的浓度或重量，A、Ais分别为测得组分及内标物的峰面积，F1为直线的斜率或比例常