抗氧化活性实验方法[借鉴].docxVIP

方法整理 | 借鉴参考collection of questions and answers 方法整理 | 借鉴参考 collection of questions and answers 方法汇编 | 精品资料 PAGE 1 借鉴参考 | 实用可编辑 抗氧化活性实验方法（体外实验） 1、清除DPPH自由基能力的测定 称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液。分别取2mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。取上清液于517nm处测吸光值。用Vc作为阳性对照。样品对DPPH自由基的清除率用以下公式计算： DPPH A0—2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值； A1—2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值； A2—2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。 2、总还原能力的测定 在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃反应20min。取出后加入2.5mL 10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水和0.5mL FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。Vc作为阳性对照。 3、对Fe2+离子螯合能力的测定 分别取1mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。EDTA为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下： Fe2+ A0—1mL蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值； A1—样品溶液反应后的吸光值； A2—0.1mL的蒸馏水代替反应体系中FeCl2溶液后的吸光值。 4、超氧自由基（O2-）清除率的测定 采用邻苯三酚自氧化法测定。取50mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.2）4.5mL，置25℃水浴中保温20min，分别加入1mL样品溶液和0.4mL 25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1mL 8mmol/L HCl终止反应，于299nm处测定吸光度（Ax），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。按下式计算O2-清除率： O2- A0—空白对照液吸光度；Ax—样品溶液吸光度。 5、羟自由基（?OH）清除率的测定 利用H2O2与Fe2+混合产生?OH，在体系中加入水杨酸捕捉?OH并产生有色物质，该物质在510nm下有最大吸收。反应体系中含8.8mmol/L H2O2 1mL、9mmol/L FeSO4 1mL、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL，不同浓度的样品溶液1mL。最后加H2O2启动反应，37℃反应30min，以蒸馏水为参比，在510nm下测定各浓度的吸光度。考虑到样品本身的吸光值，以9mmol/L FeSO4 1mL、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL，不同浓度的样品溶液1mL和1mL蒸馏水作为样品的本底吸收值。按下式计算?OH清除率： ?OH A0—空白对照液的吸光度； Ax—加入样品溶液后的吸光度； Ax0—不加显色剂H2O2样品溶液本底的吸光度。