（一）原核生物DNA复制过程.ppt

DNA复制过程;1.复制的起始;DNA复制的起始就是要解开双链和生成引物。 (1)DNA解成单链 由拓扑异构酶松弛超螺旋，解螺旋酶 解开双链，SSB结合到单链上使其稳定。 复制起始的解链需要多种蛋白质参与。这些蛋白质与复制起始点的特有序列结合，促使其邻近的DNA解链。 ; 首先起始复合体（DnaA-ATP）与4×9bp重复序列结合，3×13bp(富含AT)重复序列在Ⅱ型拓扑异构酶的作用下，使3×13bp重复序列区域松弛，再在DNA解旋酶(DnaB蛋白）的作用下，3×13bp区域发生解链；复制泡被单链结合蛋白(SSB蛋白)覆盖，以免断裂和再复性；引物酶结合到模板DNA上并合成一段短的RNA，作为合成DNA的引物，引发第一个复制叉的先导链的复制，接下来是双向复制。;(2)引物合成 引发体引导引物酶到达适当的位置合成引物。;参与原核生物复制起始的主要成分;2.复制的延长 1）在DNA聚合酶Ⅲ的作用下 2）前导链合成1000-2000个核苷酸后 3）随从链开始合成，岗崎片段的长度 为1000-2000个（大肠杆菌）  4）PolⅢ为不对称二聚体， 一个作用于前导链， 另一个作用于随从链(loop)。 ;3′; ; ;三、复制的终止;（二）真核生物DNA的复制特点 酵母的复制起始点称为ARS(autonomously replicating sequences,自主复制序列 )，长约15Obp左右，包括数个复制起始必需的保守区，其核心序列富含AT。真核生物DNA复制的起始需要起点辨认复合物(ORC)参与。真核生物DNA复制叉的移动速度比原核生物慢得多（大约只有5Obp/s，还不到大肠杆菌的1/20）。;1．DNA复制起始过程; 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。相关的激酶都有调节亚基即细胞周期蛋白(cyclin)，和催化亚基即细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)。 ;CDK; 哺乳类动物细胞内还发现天然抑制CDK的蛋白质，例如锚蛋白(ankynin)是CDK4的特异性抑制物，P21蛋白能抑制多种CDK。锚蛋白和P21蛋白的抑制/活化可使细胞周期开放/关闭，因此被形容为细胞周期的检查点蛋白。 ; RF有多种如RFA、RFB、RFC等，是调节细胞DNA复制的重要蛋白质。在蛋白激酶的作用???被磷酸化，激活或抑制RF的活性。而蛋白激酶包括调节亚基（又称细胞周期蛋白）和催化亚基（又称细胞周期蛋白依赖激酶，CDK），且各有多种。从而对DNA复制起始进行精确及多样化控制,使多位点复制呈时序性而非同步性。;PRA：复制蛋白A;2．RNA引物的合成;3.DNA链的延伸;两条链均按5’到3’方向合成，一条链3’末端的方向朝着复制叉前进的方向，可连续合成，称前导链（leading strand）。另一条链5’末端朝着复制叉，合成是不连续的，形成冈崎片段，此链称后随链(lagging strand)。;4. RNA引物的水解 ;5．DNA大分子的形成