临床微生物检验技术 细菌对抗菌药物的敏感试验 细菌对抗菌药物的敏感试验.ppt

第8章 细菌对抗菌药 物的敏感试验 第一节 临床常用抗菌药物 第二节 抗菌药物敏感试验方法 抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物 前者是真菌、放线菌、细菌等的代谢产物 后者是经化学改造的半合成抗生素和化学合成药物。 一、抗菌药物分类 （一）β－内酰胺类抗生素 1、青霉素类 2、头孢菌素类 3、碳青霉烯类 4、头霉素类 5、单环β－内酰胺类 6、氧头孢烯类 7、β－内酰胺酶抑制剂 （二）氨基糖苷类 （三）喹诺酮类 （四）大环内酯类 （五）糖肽类 （六）磺胺类 （七）四环素类 （八）氯霉素类 （九）林可霉素类 （十）合成的抗菌药物 二、常规药敏试验药物选择原则 常规药敏试验抗菌药物的分组建议 在标准中分成A、B、C 、 U四组 A组所列药物为常规、首选试验组合并常规报告的药物 B组可用于首选试验, 但只是在A组抗生素耐药、过敏、无效或多部位感染时选择性地报告 C组药物为替代性或补充性的药物，在A、B组药物过敏或耐药时选用 U组药物仅用于治疗泌尿道感染，不作为泌尿道外分离菌的常规药敏试验 第二节 抗菌药物敏感试验方法 抗菌药物敏感性试验（AST）：体外测定抗菌药物抑制或杀灭细菌的能力 1、敏感（S）：分离菌株能被测试药物使用常规剂量时，在感染部位通常可达到的抗菌药物浓度所抑制 2、耐药（R）：分离菌株不被测试药物常规剂量可达到的药物浓度所抑制 3、中介（I）：抗菌药物在生理性浓集的部位有效，数据介于敏感、耐药之间，为缓冲区，用以避免微小的、不能控制的技术因素引起的对结果解释的偏差 纸片扩散法 稀释法（常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法） 抗菌药物梯度法 一、纸片扩散法 纸片琼脂扩散法 K-B法 适于在MH琼脂上快速生长的需氧或兼性厌氧细菌 定性试验 （一）原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内，测试菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈（抑菌圈） 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC负相关 （二）材料 1、培养基 水解酪蛋白（MH）培养基是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基 PH7.2-7.4，内径90mm平板，25ml，厚4mm，4℃保存 2、抗菌药物纸片 选择直径为6.35mm，吸水量为20μl的专用药敏纸片，用逐片加样或浸泡方法使每片含药量达到规定。 含药纸片密封，-20℃或4℃保存 用前室温平衡1-2h 有效期 3、菌液的制备 直接菌落悬液法 生长法：接种MH肉汤， 35℃ 4h 用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度 0.5麦氏比浊管（1.5×108 CFU/ml） 暗处保存，半年配置1次 菌悬液制备后应在15min内接种完毕。 直接菌落悬液法 无菌挑取孵育16～24h的平板上4～5个菌落，置于无菌肉汤或生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。 4、接种 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀涂抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 8、 报告 根据CLSI（美国临床实验室标准化委员会）标准，旧称NCCLS,作出“敏感”,“耐药”和“中介”的判断。 （五）质量控制 影响因素 培养基：成分、PH、厚度、硬度、湿度 药敏纸片：重量、直径、吸水性、保存 菌量：浓度、接种量、麦氏比浊标准管 操作方法：菌液被培养基吸收后再贴纸片，菌液制备后15min内接种完毕 培养条件、温度、时间 测量工具的精度及测量方法 质控标准菌株 二、稀释法 最低（小）抑菌浓度（MIC) 肉眼未见细菌生长的药物最低浓度 所测得的某抗微生物药能抑制检测菌肉眼可见生长的最低浓度 将抗菌药物用肉汤培养基、琼脂培养基进行倍比系列稀释 稀释法药敏试验较准确（定量） 操作繁琐 稀释法包括肉汤稀释法、琼脂稀释法等 微量稀释法：稀释板上含多种对倍稀释的冻干抗菌药物，操作简便 将被检菌株接种于一组含有不同稀释度抗菌药物的培养基内，经35 ℃培育一定时间，读取MIC ，即为该菌对抗菌药物的敏感度 1、常量肉汤稀释法 用MH液体培养基将抗菌药物作不同浓度的稀释，接种待测菌，定量测定抗菌药物对细菌的最小抑制浓度（MIC） 培养基：MH 液体培养基 抗菌药物储存液：采用标准品，不可使用口服制剂 接种菌液：同0.5麦氏比浊管浊度（108 CFU/ml） 上述菌液用M-H肉汤做1:100稀释（106 CFU/ml） 1ml菌液加1ml含药肉汤，菌液终浓度5×105CFU/ml 步骤 1、排列无菌试管10支，除第1管外，每管加入MH 液体