MTT法测细胞毒性.doc

MTT法测细胞毒性 试剂 MTT溶液 四甲基偶氮唑盐（MTT）溶于PH7.2的磷酸盐缓冲液中，浓度为5mg/ml，除菌后2ml分装，于4℃避光保存。 含10%SDS的0.01M HCl SDS 10g 浓HCl（36%） 86.2 ul 定容至100ml，过滤除菌 方法 将SP2/0细胞计数，调节细胞数至105/ml，制备10ml细胞悬液，加入96孔板，100ul/孔，即细胞数104/孔。空白孔不加细胞悬液。 5%CO2,37℃条件下培养24小时。 每孔加入用含5%血清的DMEM 10倍系列稀释的毒素100ul。阴性对照孔不加毒素。 5%CO2,37℃条件下培养72小时。 吸除药液120 ul, 每孔加入新鲜配制的MTT溶液20ul,即终浓度为1mg/ml，37℃条件下培养4小时。 吸去上清50 ul，每孔加入150 ul含10%SDS的0.01M HCl溶液，震荡30分钟。 酶标仪上测定A570。 计算细胞死亡率： 细胞死亡率（%）=（1-实验组A570/对照组A570）×100% 注意 细胞数范围：（0.5~2）×104。 MTT终浓度为0.5~2.5mg/ml，但一般浓度在0.5~1mg/ml就可以获得满意的结果。 加入MTT后，37℃条件下培养4~6小时。 设置空白与对照 空白孔：——+——+MTT+有机溶剂 对照孔：细胞+——+MTT+有机溶剂 5．DMSO易结冰（其溶点为18~20℃），室温偏低的条件下影响甲肷的溶解，使检测的光吸收值降低，且有机溶剂溶解的时间不能过长，如10分钟就可以获得结果。用SDS作溶剂可使所测光吸收值数日不变。