初级检验士考试(微生物学检验)讲义第十章细菌生物化学试验.docxVIP

精品资料分享 精品资料分享 细菌的生物化学试验 ?考点 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 各种酶类试验 抑菌试验 复合生化试验 【内容讲解】 不同细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产 物又各具有不同的生物化学特性，为此，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。 一、碳水化合物的代谢试验 原理： 由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能 分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。 糖（醇、苷）类发酵试验 原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖 类的能力不同，分解糖类后的终 末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。 培养基：在培养基中加入 0.5%?1%勺糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水 杨苷等）。 方法：接种，培养。 结果： 产酸：培养基中的指示剂呈酸性反应。 产气：可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。 不分解：培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。 应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对 肠杆菌科细菌的鉴定 尤为重要。 氧化-发酵试验（0/F试验） 原理： 氧化型：仅在有氧环境中分解葡萄糖 发酵型：在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖 产碱型：在有氧或无氧环境中都不能分解葡萄糖 培养基： HL （ Hugh-Leifson ）培 养基 方法：将待检菌同时穿刺接种两支 HL培养基，其中一支培养基滴加 无菌的液体石蜡（或其他矿物油）， 高度不少于1cm。将培养基于35C培养48h或更长。 结果： 开管 封闭管 产碱型 - - 氧化型 + - 发酵型 + + r肠杆菌科细菌（发酵型） 〔非发酵菌（产碱型/氧化型） -葡萄球菌（发酵型） I徴球菌C氧化型） 3 -半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 原理： 邻-硝基酚-P -D-半乳糖昔（OMPGL 半乳糖右朗 .邻-硝基酚 〔黄色） 邻-硝基酚-3 -D-半乳糖苷（ONPG 3 -半乳糖苷酶 邻-硝基酚 （黄色） 试剂：0.75M ONPG溶 液 方法：从克氏双糖铁培养基上取菌， 于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液， 加入一滴甲苯并充分振摇, 使酶释放。将试管置 37C水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min?3h观察结果。 结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在 20?30min内显色。 应用： 迅速及迟缓分解乳糖的细菌 ONPC试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。 本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。 七叶苷水解试验 原理： 七叶昔细菌■七叶素枸椽酸琳巽色化合物 培养基：七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。 方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。 结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 应用：主要用于 D群链球菌与其他链球菌的鉴别 。 JD群链球菌（ 〔其它链球菌（-） 甲基红试验 原理： 细菌. - 葡萄糖 丙酮酸 混合酸（pH I ） I 醇酮醛（pH t ） V 红色反应（+ ） 橋黄色（_〉 培养基: 葡萄糖蛋白胨水培养基 方法：将待检菌接种于上述培养基中，培养 2?4d,于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 TOC \o 1-5 \h \z 结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性 。 应用： 丿大肠埃希菌（+） i产气肠杆菌（-） 肠杆菌科：沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属（ +） 肠杆菌属、哈夫尼亚菌属（-）。 V-P试验 原理： 细菌 脱浚 0H 董萄穂 丙酮酸 乙離甲基甲醇 二乙醸 °卜基 红色化合物-:+） 培养基: 葡萄糖蛋白胨水培养基 方法：将待检菌接种于上述培养基中， 于35C培养48h后加入甲液（6%a -萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH 溶液），振摇。 结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于 35C4h后仍如故者即为阴性。 应用：本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。 二、蛋白质和氨基酸的代谢试验 原理：不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。细菌对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白 质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。 明胶液化试验 原理： 方法：将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于 22C培养7d,逐日观察结果。若用 35C孵育，因明胶在此 温度下自行液化，故在观察结果前，先置 4C冰箱内30min，再看结果。 氨基酸（流动液体）明胶酶 氨基酸 （流动液体） 明胶 （半固体） 结果：培 基 呈液化