食品理化检验 蛋白质和氨基酸的测定 任务六 蛋白质测定2.ppt

LOGO * * * * 项目三 食品一般营养成分的测定 任务六 蛋白质与氨基酸 的 测 定 凯氏定氮法 常量凯氏定氮法 微量凯氏定氮法 半微量凯氏定氮法 2 3 1 (1) ?原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 凯氏定氮法 1、通过学习觊氏定氮法的原理，我们可知道操作分为哪几个大的步骤？ 2、加入硫酸钾、硫酸铜的作用是什么？ 自学引导 凯氏定氮法 原理： 样品消化 蒸馏 吸收 滴定 消化 样品消化： 为了加速蛋白质消化，缩短消化时间，常加入下列物质：▲ K2SO4：可以提高溶液的沸点；使硫酸的沸点从340度升高至400度以上；但加入量不可太多，否则消化体系温度过高引起生成的铵盐分解而损失氨；也可加入硫酸钠，氯化钾等提 高沸点，但效果不如硫酸钾。  消化 消化 蒸馏：在消化完全的样品中加入浓NaOH使呈碱性，即放出氨气； 碱化、蒸馏 蒸馏中反应室的颜色 蒸馏一段时间后反应室的颜色 蒸馏 接收瓶的颜色变为蓝色 吸收与滴定：放出的氨用硼酸溶液吸收，后用盐酸标准溶液滴定形成的硼酸铵：批示剂为：1:5的甲基红乙醇与溴甲酚绿乙醇。 2NH3 + 4H3BO3 = (NH4)2B4O7 + 5H2O (NH4)2B4O7 + 5H2O + 2HCl = 2NH4Cl + 4 H3BO3 吸收和滴定 2.试剂及设备 1）试剂 浓硫酸、硫酸钾、硫酸铜、20g/L硼酸溶液、 400g/L氢氧化钠溶液、甲基橙指示剂混合指示剂。0.05mol/L盐酸标准滴定液、30%过氧化氢 2）设备 凯氏烧瓶、电子天平、温控电炉、微量酸式滴定管、小漏斗 3、分析步骤 1）试样的处理 称取0.20g～2.00g固体试样或2.00g～5.00g半固体试样或吸取； 10.00mL～25.00mL液体试样(约相当氮30mg～40mg)，移人干燥的100mL或500mL定氮瓶中，加人0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20mL硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗 　称量 电子天平的使用 天平的使用 凯氏烧瓶 凯氏烧瓶中加入硫酸铜。硫酸钾 消化 将准备好的凯氏烧瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。开始用微火小心加热，（小心瓶内泡沫冲出而影响结果），待内容物全部炭化,泡沫完全停止，瓶内有白烟冒出后，升至中温，白烟散尽后升至高温，加强火力,并保持瓶内液体微沸。（为加快消化速度,可分数次加入10mL30%过氧化氢溶液，但必须将烧瓶冷却数分钟以后加入！） LOGO * * * *