动物疫病检验技术 组织学切片的制备与观察 组织学切片的制备与观察.pptx

动物疫病检验技术 黑龙江农业经济职业学院 组织学切片的制备与观察 目 录/CONTENTS 1 组织学切片制备方法分类 2 石蜡切片的基本制作流程 组织学切片制备方法分类 组织学切片制备方法分类 1、细胞培养：观察单个完整的细胞常用细胞培养。 心肌细胞免疫组织化学染色 组织学切片制备方法分类 2、细胞涂片：观察骨髓、血液或脱落细胞常用细胞涂片。 血液涂片吉姆萨瑞士染色 组织学切片制备方法分类 3、组织铺片：观察膜片状组织如大网膜、肠系膜或皮下疏松结缔组织就常用组织铺片。 大鼠肠系膜铺片 组织学切片制备方法分类 4、组织磨片：观察坚硬的组织，如硬骨和牙就常用磨片。 长骨磨片 组织学切片制备方法分类 5、分离标本：利用化学药品溶去细胞间质，使细胞分散，观察单个完整的细胞。 气管上皮分离标本HE染色 组织学切片制备方法分类 6、压片标本：将小块组织染色后压平于载玻片上，观察完整的组织结构。 猫的肋间肌组织压片 组织学切片制备方法分类 7、组织印片：将新鲜组织肝脾等压印于载玻片上，固定后染色。 脾脏的组织印片 组织学切片制备方法分类 8、组织切片：又分为石蜡切片火棉胶切片、冰冻切片等。石蜡切片可以制成极薄的切片而且结构保存完整，它还便于制作大批的或是连续的切片，而且石蜡包埋的组织块又便于长期保存因它具有以上优点，所以石蜡切片是研究组织学最为广泛的基本制片方法。 食管癌石蜡切片HE染色 石蜡切片的基本制作流程 石蜡切片的基本制作流程 石蜡切片的基本制作流程 1、取材 采取病料时，不可挤压、扯拉病料，以防人为损伤。 采取病料越新鲜越好，一般不超过动物死后24小时，应选择病变明显部和可疑病变部切取，切取时要由表及里、由浅入深，并包括周围正常组织一部分。 切取组织块大小为长宽高为1.5cm*1.5cm*0.3cm，最厚不易超过0.5cm，组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。 石蜡切片的基本制作流程 2、固定 固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与和组织相似的结构状态。 石蜡切片的基本制作流程 3、冲洗 固定后的组织块应将固定液及时冲洗，有停止固定的作用。防止固定过渡，有利于制片染色。酒精固定的组织材料不需要冲洗。 石蜡切片的基本制作流程 4、脱水 经过固定的组织冲洗后，要进行脱水。 脱水的目的在于，将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡进入组织创造条件。 常用的脱水剂是酒精。由于酒精能以任何比例与水结合，对组织穿透力强，又能使组织硬化，因而，不能将组织从水中直接移入到浓度高的酒精中，应从低浓度逐渐到高度。 脱水必须充分，否则会给浸蜡造成困难。 石蜡切片的基本制作流程 5、透明 透明的目的是将组织内的酒精用矿物油和植物油置换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，所以称为透明。 常用的透明剂是二甲苯，因其穿透力较强，所以组织在二甲苯中停留的时间不能过长。 一般透明时间在30分钟左右。 石蜡切片的基本制作流程 6、浸蜡 浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入熔化的石蜡中浸泡，使石蜡进入组织块中，冷却后，才能进行切片。 通常选择熔点在52至56摄氏度的石蜡。 石蜡切片的基本制作流程 浸蜡的过程是浸蜡的过程 二甲苯石蜡混合液(1:1) 1小时 二甲苯石蜡混合液(1:2) 1小时 石蜡(1) 1小时30分钟 石蜡(2) 1小时30分钟 上述过程可在56-58摄氏度的恒温箱中进行。 石蜡切片的基本制作流程 7、包埋 先将熔化的石蜡倒入包埋框，再用加热的镊子将预包埋的组织块在蜡液内放置好。 注意各组织块之间的距离和每个组织块的位置和方向，迅速倾倒蜡液淹没组织块，待蜡液出现凝固层后，轻轻放入冰盘上使其凝固。 石蜡完全凝固后，倒出冷缩的蜡块，用加热的外科刀修整组织块。 石蜡切片的基本制作流程 8、组织切片 一般切四至六微米的切片。 如要观察病变的连续性，可制作连续切片。 石蜡切片的基本制作流程 9、染色 苏木精-伊红染色 组织化学染色 免疫组织化学染色 免疫荧光化学组织染色 原位杂交技术 石蜡切片的基本制作流程 苏木精-伊红染色简称HE染色，可将细胞核染成蓝色，细胞浆染成红色。 石蜡切片的基本制作流程 苏木精-伊红染色原理 细胞核里的染色质主要是DNA，带负电荷，呈酸性。与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 细胞浆内主要成分是蛋白质，可与酸性染料伊红结合，伊红可使细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。 石蜡切片的基本制作流程 组织切片