生物制药与药品检验技术 走近盐析法—盐析法“操作指南” 课件：盐析法“操作指南”.ppt

“ ” “ ” 生物制药与药品检验技术 宁波职业技术学院 Biopharming and Drug Test Technology 项目一 血清蛋白类药物的原料制备与分析检验 Preparation and analysis of raw materials for serum protein drug 盐析法“操作指南” 主讲教师：汤晓 学习内容 操作注意事项： （1）盐的饱和度 （2）pH值 （3）蛋白质浓度 （4）温度 （5）脱盐 学习重点： （1）盐的饱和度 （2） pH值 讨论 结合实践，你认为在盐析过程中需要注意哪些问题？ 1. 盐的饱和度 （degree of saturation） 不同蛋白质，盐的饱和度不同（原因？） 分离蛋白质混合物（mixture）时，盐的饱和度由稀到浓 出现第1种蛋白质沉淀，分离（separate），增加盐饱和度，使第2种蛋白质继续沉淀 （precipitate） 例如：用硫酸铵盐析分离血浆中的蛋白质（protein） 饱和度达20%时，纤维蛋白原先析出； 增至28-33%时，优球蛋白析出； 再增至33-50%时，拟球蛋白析出； 饱和度大于50%以上时清蛋白（白蛋白）析出。 又如：用同饱和度硫酸铵，从牛胰酸性提取液中得到9种以上蛋白质及酶 思考：实验的5个饱和度能相应收获什么蛋白质？ 2. pH值? （pH value） pH值在等电点 pI时，蛋白质溶解度最小，易沉淀 盐析时，pH值常在被分离的蛋白质等电点附近 对比实验操作：选取了哪2个pH值？为什么？ 注意：如蛋白质遇酸易变性（denaturate），在缓冲液中进行 3. 蛋白质浓度 （concentration） ①相同盐析条件，蛋白质浓度越高越易沉淀 浓度过高，引起杂蛋白的共沉作用（co-sedimentation） 选择适当浓度，尽可能避免共沉 ②某一蛋白质欲进行两次盐析，第1次盐析分段范围较宽，第2次则范围变窄 例如：胆碱酯酶用硫酸铵盐析时，第1次硫酸铵饱和度为35%至60%，第2次为40%至60% 4. 温度 （temperature） 一般可在室温（room temperature）下进行 某些对热特别敏感（sensitive to heat）的酶：宜维持低温条件 （low temperature conditions） 5. 脱盐 （desalination） 目的：获得纯品（purity） 方法：最常用透析法 （dialysis） 需时长（过夜），低温进行，加入防腐剂避免污染 透析袋预处理（pretreatment） 透析 透析袋 分子筛层析脱盐：常用SephadexG-25柱层析 （column chromatography） 市场价：800元/100g 凝胶层析 总结：盐析法“操作指南” 盐的饱和度 分离蛋白质混合物，盐的饱和度由稀到浓 pH值 pH值常在被分离的蛋白质等电点附近 蛋白质浓度 相同盐析条件，蛋白质浓度越高越易沉淀 温度 一般室温 脱盐 透析、分子筛层析 亮亮图文旗舰店 * * * * * * “ ” “ ” 亮亮图文旗舰店 * *