K212 食品快速检测技术、实习实训库 配套项目实训手册、项目操作实训指导书 食品快速检测技术项目实训手册.doc

农产品与食品质量检测技术教学资源库 PAGE 27 《食品快速检测技术》课程实训指导手册 项目一 速测卡法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药 （依据国标GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基酸甲酯类农药残留的快速检测） 一、实训目的 掌握速测卡法检测农残原理，能够完成速测卡测农残样品前处理，能够使用速测卡完成蔬菜样品有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的操作，能够对检测结果进行判读并判断样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留是否超标。 二、实训原理　 胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 三、实训要求 本实验项目操作标准依据GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基酸甲酯类农药残留的快速检测方法。本项目全面考察学生对速测卡测定蔬菜中有机磷和氨基酸甲酯类农药残留的实施过程中所涉及样品处理、检测操作、结果判读等3个环节与过程的整体把握和运用能力以及在整个实验过程中的操作文明和操作安全意识。本项目按1人/组为单位进行操作，要求在25min内完成蔬菜样品的前处理(2min)、样品检测(20min)和结果判读(3min)。 四、实验材料和设备 1 试剂和溶液 1.1 固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片（速测卡） 1.2 pH7.5缓冲溶液：分别取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4·12H2O]与1.59g 无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500mL蒸馏水溶解。（速测卡试剂盒通常会有配套缓冲溶液） 2 仪器和设备 2.1 常量天平 2.2 有条件时配备37℃±2℃恒温装置 五、实训任务 1、蔬菜样品前处理 表面法：擦去青菜表面泥土，滴2滴～3滴缓冲溶液在青菜叶表面，用另一片青菜叶在滴液处轻轻摩擦。 2、速测卡测农残检测操作 （1）取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。 （2）放置10min 以上进行预反应，有条件时在37℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 （3）将速测卡对折，用手捏3min 或用恒温装置恒温3min ，使红色药片与白色药片叠合发生反应。 （4）每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。 3、结果判定 与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色为阳性结果。白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同为阴性结果。 六、原始结果记录表 表1-1 速测卡检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留记录表 样品名称 检测现象（颜色变化情况） 检测结果 检测结论 红色卡片 白色卡片 七、考核标准 表1-2 速测卡检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留考核标准 序号 考核重点内容 考核标准 参考分值 1 样品处理操作 滴液及摩擦操作正确、熟练 20 1 速测卡的使用操作 滴液量适当、滴液位置正确，预反应和检测反应操作正确，会判定检测结果 40 3 实训报告 完成认真，内容正确，结果分析准确； 20 4 问题思考与答疑 操作过程中，积极思考，能综合应用所掌握的基本知识，分析问题和解决问题； 10 5 纪律 实训过程中听从指挥，服从安排，操作认真 10 项目二 分光光度法（酶抑制率法）检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药 （依据国标GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基酸甲酯类农药残留的快速检测） 一、实训目的 熟悉分光光度分快速检测农残操作思路，能够完成分光光度法快速检测蔬菜中有机磷与氨基甲酸酯类农药残留样品前处理，能够完成对照液测试和样品检测，能够对检测结果进行计算和判读。 二、实训原理　 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 三、实训要求 本实验项目操作标准依据GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基酸甲酯类农药残留的快速检测方法。本项目全面考察学生对分光光度法（酶抑制率法）检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药的实施过程中所涉及设备调试、对照溶液测试、样品溶液测试、结果计算和判定等4个环节与过程的整体把握和运用能力以及在整个实验过程中的操作文明和操作安全意识。本项目按2人/组为单位进行操作，要求在60min内完成样品处理（10min）、对照溶液测试(20min)、样品测定(20min)和结果数据处理(10min)。 四、实验材料和设备 1 试剂和溶液 1.1 pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g磷